目的:建立高效液相色谱（HPLC）和气相色谱串联质谱（GC-MS）的方法对肺癌细胞系A549细胞内胆固醇浓度和肺组织内27羟基胆固醇（27-OHC）水平有效进行定性定量分析,为以细胞内胆固醇含量作为指标鉴定组织细胞泡沫化程度以及探讨CYP27通路参与胆固醇代谢的后续研究奠定基础。方法:A549细胞超声裂解后,用KOH乙醇溶液和三氯乙酸分别除去细胞裂解液中的甘油三酯和蛋白,再以正己烷—异丙醇的二元提取剂将细胞内的胆固醇进行萃取。胆固醇含量采用HPLC法测定,色谱柱为ZORBAX SB-C18（4.6 mm×150 mm,5μm）,流动相为乙腈—异丙醇（67:33）,流速为1 mL·min^-1,检测波长为206 nm。定量称取肺组织,施行高速匀浆法,获得匀浆液。按匀浆液:氯仿（3:5）加入氯仿萃取。有机相用水冲洗直至中性,氯仿在减压条件下移去。加入衍生化试剂0.1 ml三甲基氯硅烷/六甲基二硅氮烷/吡啶（1:2:3）60℃反应60 min,氮气吹干,氯仿复溶,进GC/MS分析。色谱柱为HP-5MS石英毛细管柱,电离方式（EI）正离子扫描,单次进样1.0μl,载气为氦气。利用气质联用方法分析肺组织内27-OHC的水平。结果:利用本实验所建立的HPLC检测方法,胆固醇标准品保留时间为8.2 min,5 ng·μL^-1—100 ng·μL^-1范围内呈良好的线性关系（R=0.9999）;细胞内胆固醇和半数量胞内胆固醇出峰时间均与标准品溶液出峰时间一致,均在8.2 min处出峰。胞内胆固醇定量检测,进行方法学验证,其精密度、重复性、稳定性均良好,RSD均低于3.0%,平均加样回收率为94.89%,RSD为2.86%（n=6）,检测限为2.665ng·μL^-1（S/N=3）定量限为10.197 ng·μL^-1（S/N=10）。利用气质联用方法检测,肺组织内27羟基胆固醇碎片总离子流在55.39 min出峰,衍生化后的碎片质荷比为m/z 456,m/z 546。可以将其定性测出。对其定量检测,进行方法学验证初步预测,所测单次样品的加样回收率部分数值在92%—105%范围之外。其精密度、重复性、稳定性等方法学验证指标有待进一步优化。结论:本文所建立HPLC检测的方法准确、精密度高、重复性好、准确度高、操作简便,回收率也在符合要求的范围内,经方法学验证,后续可用于A549细胞内的胆固醇水平的批量检测;为进阶探讨肺组织损伤与胆固醇代谢失调的病理进展关系奠定基础。气相色谱串联质谱检测肺组织内27-OHC;该法目前可以有效定性检测出组织内27-OHC。但还需要进一步进行方法学论证。