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目的:通过临床研究,观察丹栀逍遥散治疗肝郁化火型广泛性焦虑障碍的有效性以及其能否促进广泛性焦虑障碍患者中枢神经系统神经元再生,提高5-HT水平,改善焦虑症状;通过动物实验研究,观察丹栀逍遥散能否调控Notch信号通路促进广泛性焦虑障碍机体海马区神经血管再生,从而提高海马区5-HT能系统功能,降低海马对厌恶刺激的敏感性,改善焦虑情绪,为中医药治疗广泛性焦虑障碍开拓新的思路与方法。方法:临床研究部分纳入了106例符合纳入标准的广泛性焦虑障碍患者,将他们随机分为治疗组和对照组,其中治疗组53例,给予中药丹栀逍遥散治疗;西药组53例,给予盐酸丁螺环酮片治疗,两组均治疗14天。采用HAMA及肝郁化火型中医证候积分表观察治疗前后两组患者各自焦虑症状评分,并采用Elisa法检测两组患者治疗前后外周血中5-HT、NSE、IGF-1水平变化情况。动物实验部分:将120只Wistar大鼠分为对照组、模型组、DZXYS组、DZXYS+DAPT组和丁螺环酮组五组。给予除对照组外其余各组束缚法及不确定空瓶刺激法21日制备肝郁化火型广泛性焦虑障碍模型,而后各组分别给予相应药物干预治疗14日,药物干预期间,不确定空瓶刺激法及束缚法仍同步进行。整个过程持续监测大鼠体重、食量变化情况;通过旷场实验、高架十字迷宫实验监测大鼠行为学状态;灌胃7日、14日后每组分别随机取材12只大鼠,通过Elisa法观察各组大鼠海马5-HT浓度,PCR法观察大鼠海马5-HT1Am RNA表达量,免疫荧光染色法观察大鼠海马DG区Brd U+/Nestin+、Brd U+/Neun+、Brd U+/GFAP+数量,免疫组化法观察大鼠海马DG区VEGF、VEGFR2、CD34抗体染色IOD、AOD值,实时荧光定量PCR和Western blot监测大鼠海马区Notch信号通路NOTCH1、HES1、HES5、DLL4蛋白表达情况。结果:临床研究:治疗组与对照组GAD患者HAMA评分及肝郁化火型广泛性焦虑障碍中医证候积分表得分均较治疗前有显著下降（p＜0.0001,p＜0.0001;p＜0.0001,p＜0.0001）,根据HAMA得分减分率进行两组患者疗效比较,差异无统计学意义,根据肝郁化火型GAD中医证候积分表减分率进行两组患者疗效比较,发现治疗组在肝郁化火中医症状改善方面疗效优于对照组,差异有统计学意义（p＜0.05）;在血清学指标改善方面,治疗组与对照组患者血清5-HT、IGF-1水平均分别较治疗前上升（p＜0.01,p＜0.05;p＜0.05,p＜0.05）,NSE水平均分别较治疗前下降（p＜0.05;p＜0.05）,两组组间比较差异均无统计学意义。动物实验研究发现:2.1一般情况观察:GAD造模第28天后,丁螺环酮组、DZX YS组、DZXYS+DAPT组、模型组大鼠进食量较对照组显著降低（p＜0.0001,p＜0.0001,p＜0.0001,p＜0.0001）,体重增长率较对照组显著降低（p＜0.0001,p＜0.0001,p＜0.0001,p＜0.0001）,采用药物干预7天时,各药物干预组与模型组进食量无统计学差异,干预第14天后,DZXYS、DZXYS+DAPT组大鼠食欲下降得到明显逆转（p＜0.0001,p＜0.0001）。体重增长率经丁螺环酮、DZXYS、DZXYS+DAPT分别干预7天、14天后得到提高（p=0.0103,p＜0.0001,p＜0.0001;p＜0.0001,p＜0.0001,p＜0.0001）,具有显著时间效应。2.2行为学观察:造模第28天后,模型组、丁螺环酮组、DZXYS组、DZXYS+DAP T组大鼠中央区运动距离较对照组显著降低（p＜0.0001,p＜0.0001,p＜0.0001,p＜0.0001）,药物干预7天、14天后丁螺环酮、DZXYS、DZXYS+DAPT组较模型组持续、显著升高（p=0.0010,p=0.0009,p＜0.0001;p＜0.0001,p＜0.0001,p＜0.0001）,其变化情况与旷场中央区停留时间变化情况高度一致。高架十字迷宫实验结果显示造模后第28天,各组大鼠OT%值、OE%值均较对照组显著降低（p＜0.0001,p＜0.0001,p＜0.0001,p＜0.0001;p＜0.0001,p＜0.0001,p＜0.0001,p＜0.0001）。药物干预7天、14天后,丁螺环酮、DZXYS、DZXYS+DAPT组OT%值较模型组显著升高（p＜0.0001,p=0.0046,p＜0.0001;p＜0.0001,p＜0.0001,p＜0.0001）,OE%值较模型组显著升高（p=0.0035,p=0.0176,p=0.0048;p＜0.0001,p＜0.0001,p＜0.0001）,两者均具有显著时间效应。2.3 5-HT能系统水平变化情况:药物干预7天、14天后,模型组大鼠海马5-HT水平、5-HT1Am RNA表达量较对照组显著降低（p＜0.0001,p＜0.0001）,丁螺环酮、DZ XYS、DZXYS+DAPT干预7天、14天后各组较模型组5-HT水平不同程度升高（p=0.0501,p=0.0386,p=0.0212;p=0.0010,p=0.0002,p＜0.0001）,5-HT1Am RNA表达量较模型组显著升高（p=0.0120,p=0.0137,p=0.0027;p=0.0001,p=0.0002,p＜0.0001）,两组均具有显著时间效应。2.4海马DG区新增殖细胞情况:通过大鼠海马DG区Brd U+/Nestin+免疫荧光双染,发现药物干预7天、14天后,模型组较对照组Brd U+/Nestin+数量显著增加（p＜0.0001）,丁螺环酮、DZXYS、DZXYS+DAPT组Brd U+/Nestin+数量较模型组显著降低（p=0.0004,p=0.0004,p＜0.0001;p＜0.0001,p＜0.0001,p＜0.0001）,双因素方差分析显示该区新生神经干细胞数量有显著性处理效应（p＜0.0001）及时间效应（p＜0.05）;D G区Brd U+/Neun+免疫荧光双染显示药物干预7天、14天后,模型组较对照组Brd U+/Neun+数量显著降低（p＜0.0001）,丁螺环酮、DZXYS、DZXYS+DAPT组Brd U+/Neun+数量较模型组显著升高（p＜0.0001,p＜0.0001,p＜0.0001;p＜0.0001,p＜0.0001,p＜0.0001）,有显著性处理效应（p＜0.0001）和显著时间效应（p=0.0028）;DG区Brd U+/GFAP+免疫荧光双染显示,药物干预7天、14天后模型组较对照组Brd U+/GFAP+数量显著增高（p＜0.0001）,丁螺环酮、DZXYS、DZXYS+DAPT组Brd U+/GFAP+数量较模型组显著降低（p＜0.0001,p＜0.0001,p＜0.0001;p＜0.0001,p＜0.0001,p＜0.0001）,有显著性处理效应（p＜0.0001）和显著时间效应（p＜0.0001）。2.5海马DG区新生血管情况:通过大鼠海马DG区CD34、VEGF、VEGFR2免疫组织化学染色,发现模型组大鼠DG区VEGF IOD值较对照组显著降低（p＜0.0001）,丁螺环酮、DZXYS、DZXYS+DAPT干预7、14天后VEGF IOD值较模型组显著升高（p＜0.0001,p＜0.0001,p＜0.0001;p=0.0045,p=0.0067,p=0.0030）,AOD值表达结果与IOD值表达情况一致;VEGFR2 IOD值模型组较对照组显著降低（p=0.0016）,丁螺环酮组、DZXYS组、DZXYS+DAPT组干预7天后较模型组显著升高（p＜0.0001,p＜0.0001,p＜0.0001）,14天后降低（p=0.0584,p=0.100,p=0.1343）,AOD值表达情况与IOD值高度统一;DG区微血管密度（CD34染色）模型组低于对照组,但无明显统计学差异,丁螺环酮组、DZXYS组、DZXYS+DAPT组经药物干预7天、14天较模型组显著升高（p＜0.0001,p＜0.0001,p＜0.0001;p＜0.0001,p＜0.0001,p＜0.0001）,有显著性处理效应（p＜0.0001）,但无时间效应。2.6海马区Notch信号通路关键靶点变化情况:实时荧光定量PCR检测显示模型组较对照组Notch1m RNA、Hes1m RNA、Hes5m RNA、DLL4m RNA表达量显著上升（p＜0.0001;p＜0.0001;p＜0.0001;p＜0.001）,药物干预7天、14天后,丁螺环酮、DZXYS、DZXYS+DAPT组Notch1m RNA表达量较模型组显著降低（p=0.0019,p=0.0025,p=0.0002;p＜0.0001,p＜0.0001,p＜0.0001）,各组Hes1m RNA表达量较模型组显著降低（p=0.0144,p=0.0083,p=0.0061;p＜0.0001,p＜0.0001,p＜0.0001）,各组Hes5m RNA表达量较模型组显著降低（p=0.0023,p=0.0494,p=0.0073;p＜0.0001,p＜0.0001,p＜0.0001）,DLL4m RNA表达量,经各组药物干预7天后,较模型组显著降低（p＜0.0001;p＜0.0001;p＜0.0001）,药物干预14天后DZXYS、DZXYS+DAPT组DLL4m RNA表达量较模型组明显升高（p=0.0187;p=0.0132）,WB蛋白表达情况与以上PCR结果基本一致。证实GAD大鼠海马区Notch信号通路关键靶点明显上调,DG区神经元再生障碍,而DZXYS可抑制Notch信号通路关键靶点Notch1、HES1、HES5的过度上调（对DLL4为先下调后上调）,促进海马区神经干细胞向神经元分化,促进神经元再生,同时促进血管新生。结论:丹栀逍遥散可调控Notch信号通路促进广泛性焦虑障碍机体海马区神经血管再生,提高海马区5-HT能系统功能,降低机体对厌恶刺激的敏感度,改善焦虑症状。