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第一部分 HAMI 3379对长爪沙鼠脑卒中后抑郁的治疗作用目的 通过夹闭双侧颈动脉法制备短暂性全脑缺血（Transient global cerebral ischemia,tGCI）模型联合约束应激刺激建立卒中后抑郁（Post-stroke depression,PSD）模型,探究半胱氨酰白三烯受体2（Cysteine-leukotriene receptor 2,CysLT2R）拮抗剂HAMI 3379对PSD长爪沙鼠神经损伤的调控机制,为脑卒中后抑郁疾病提供新的治疗方法和实验依据。方法 1、建立长爪沙鼠PSD模型:（1）通过夹闭双侧颈动脉法制备tGCI模型,于tGCI后第2天开始连续12天每天对其进行束缚应激刺激4 h,建立长爪沙鼠脑卒中后抑郁模型。（2）通过多普勒血流仪监测tGCI模型建立过程中局部脑血流的变化情况。（3）通过糖水偏好实验和强迫游泳实验检测长爪沙鼠脑卒中后抑郁模型的建立情况。2、探究腹腔注射HAMI 3379（0.1 mg/kg/day）对PSD引起的长爪沙鼠神经损伤的治疗效果:（1）通过mNSS神经功能损伤评分评估长爪沙鼠的神经功能损伤情况。（2）通过糖水偏好实验和强迫游泳实验观察长爪沙鼠的抑郁情况。（3）通过尼氏染色观察大脑皮层组织中神经元形态和数量变化情况。（4）通过免疫荧光染色法观察大脑皮层组织中激活的小胶质细胞及神经元的变化。3、探究HAMI 3379调控PSD长爪沙鼠的神经损伤机制:（1）通过免疫荧光染色法观察HAMI 3379调控NLRP3炎症小体的激活情况。（2）通过Western Blot法检测HAMI 3379调控NLRP3炎症小体相关蛋白与焦亡的标志性蛋白GSDMD-N的表达。4、阐明HAMI 3379改善PSD的作用是否是通过调节CysLT2R实现的。HAMI 3379分别与shRNA-CysLT2R和LV-CysLT2R联合干预,探讨体内CysLT2R对缺血性脑卒中后抑郁模型的调控作用:（1）通过RT-qPCR法和免疫荧光染色法检测PSD长爪沙鼠大脑皮层组织中CysLT2R的表达量。（2）通过尼氏染色观察PSD长爪沙鼠大脑皮层组织中神经元形态和数量的变化情况。（3）通过糖水偏好实验和强迫游泳实验观察PSD长爪沙鼠的抑郁情况。结果 1、通过tGCI模型联合约束应激刺激成功构建长爪沙鼠PSD模型,与假手术组相比,模型组长爪沙鼠脑血流量明显下降,出现神经功能损伤。通过糖水偏好实验和强迫游泳实验发现与假手术组相比,模型组长爪沙鼠出现明显的抑郁样行为。2、HAMI 3379可通过减轻神经功能损伤、改善抑郁样行为、减少神经元的丢失、抑制小胶质细胞的激活和抑制大脑皮层的细胞凋亡来改善PSD长爪沙鼠的神经损伤。3、在PSD长爪沙鼠的大脑皮层中观察到NLRP3炎症小体在小胶质细胞中有明显的表达,同时检测到PSD长爪沙鼠大脑皮层中NLRP3炎症小体和焦亡相关蛋白明显激活,使用HAMI 3379治疗显著减少了 NLRP3炎症小体的激活和焦亡的发生。4、HAMI 3379通过抑制NLRP3炎症小体的表达和焦亡的发生保护PSD诱导的神经损伤作用机制依赖于CysLT2R的调控。结论 CysLT2R选择性拮抗剂HAMI 3379改善长爪沙鼠PSD后神经功能损伤的作用与抑制NLRP3炎症小体和焦亡的炎性机制有关。第二部分 HAMI 3379通过抑制NLRP3炎症小体激活/焦亡的发生改善小胶质细胞过度激活目的 本研究体外实验部分应用CysLT2R拮抗剂HAMI 3379处理OGD/R诱导的小鼠小胶质瘤细胞株BV2,探讨HAMI 3379对OGD/R诱导的BV2细胞损伤的炎性机制。通过使用HAMI 3379与NLRP3激活剂联合干预,探讨NLRP3是否参与炎性神经损伤的调控。方法 1、体外培养小鼠小胶质瘤细胞BV2,通过检测OGD不同时间（1 h、2 h、4 h）,复灌48 h对BV2细胞活力的影响:（1）观察OGD不同时间,复灌48 h对BV2细胞形态的影响。（2）通过CCK8试剂盒检测OGD不同时间,复灌48h的细胞活性。（3）通过LDH试剂盒检测OGD不同时间,复灌48 h的LDH释放量。2、探讨HAMI 3379对BV2细胞活性和LDH释放的影响。使用CCK8试剂盒和LDH试剂盒检测不同浓度（0.01、0.1、1 μM）的HAMI 3379对BV2细胞活性和LDH释放的影响。3、探讨HAMI 3379干预BV2细胞OGD/R后的损伤机制:（1）通过免疫荧光染色法观察HAMI 3379对BV2细胞激活的影响。（2）通过Western Blot和免疫荧光染色法检测HAMI3379干预BV2细胞后NLRP3炎症小体与焦亡标志性蛋白GSDMD-N的表达情况。4、通过加入NLRP3的激动剂Nigericin和Lipopolysaccharide（LPS）联合刺激验证HAMI 3379与NLRP3的调控关系。结果 1、OGD 1 h/R48 h细胞形态发生适度且稳定变化,未出现细胞活性下降和LDH释放量的增加,更符合整体实验的小胶质细胞适度激活情况。2、HMAI 3379 0.01-1μM的使用剂量对正常BV2细胞活性和LDH释放量无影响,但可改善OGD/R诱导的BV2细胞活性下降和LDH释放的增加。3、OGD/R诱导的BV2细胞中NLRP3炎症小体的激活和焦亡的发生可被HAMI 3379改善。4、通过Nigericin和LPS联合刺激引起的NLRP3炎症小体激活和焦亡的发生在HAMI 3379的作用下明显抑制。结论 CysLT2R选择性拮抗剂HAMI 3379改善OGD/R诱导的小胶质细胞损伤与抑制其NLRP3炎症小体激活和焦亡的发生密切相关。