团头鲂(Megalobrama amblycephala)属于鲤科草食性鱼类,分布于长江中下游区域的附属中型湖泊中,有生长较快、抗病力强、适温范围广、疾病少、易捕捞、肉肥质嫩、营养丰富等诸多优点,被认为是一种优良的淡水经济鱼类,近年来国内对团头鲂进化、免疫、抗病力等方面的研究较多。本研究的主要内容包括视黄醇结合蛋白(retinol binding protein, RBP)及胞内视黄醇结合蛋白(cellular retinol-binding protein, CRBP)基因的分子克隆,分析RBP基因在团头鲂不同发育时期以及不同组织中的表达情况。主要研究结果如下：1.团头鲂血清视黄醇结合蛋白基因的克隆及序列分析本研究获得了团头鲂rbp4的cDNA全长(815 bp)和基因组DNA全长(4915bp)。采用生物信息学技术进行分析,结果显示：团头鲂rbp4基因由五个外显子和四个内含子组成,符合GT/AG规则。其开放阅读框有579 bp,共编码192个氨基酸,5’端区域有34 bp,3’端有202 bp。通过对比不同物种的rbp4基因编码的氨基酸序列发现,相比其他物种,团头鲂的rbp4编码的氨基酸序列与鲤(80%)、胡子鲶(93%)、斑马鱼(88%)、虹鳟(82%)、青鳉(70%)、红鳍东方鲍(71%)等都有较高的同源性,而与绿海龟(64%)、家猫(59%)、牛(58%)、人(58%)则同源性相对较低。2.团头鲂目的基因的时空表达谱对团头鲂rbp1b、rbp2a、rbp4三个基因进行了荧光定量PCR,得到了三个基因在团头鲂不同发育时期以及不同组织中的表达谱,分析结果可看出,三种基因在不同组织中的mRNA表达量存在着显著差异,rbp1b在肾脏和脾脏中有高表达,在小肠、眼睛等器官中则表达量极低或基本未见表达；rbp2a和rbp4则在肝脏中高表达,其中rbp2a在小肠中有少量表达,而在眼球中则基本未见表达；rbp4在眼球中有少量表达,小肠中则基本未见表达。除此之外,同一基因在不同发育时期也会有明显的表达量的变化：rbp1b在团头鲂胚胎发育早期持续表达,出膜后7天内表达量持续升高；rbp2a和rbp4则在胚胎发育早期表达量都极低或基本未见表达,在出膜前后才有较高的表达。3.团头鲂rbp4启动子克隆利用热不对称PCR (thermal asymmetric interlaced PCR, TAIL-PCR)法扩增得到团头鲂rbp4基因的上游核心启动子序列,同时对来自三个不同地理种群样本进行启动子的检测,发现并验证了两个SNP位点,-385A>G以及-329C>T,经过CRS-PCR (created restriction site PCR)法检测之后,计算了三个不同地理种群中两个突变位点的基因型及基因频率。4.9-顺式维甲酸对rbp4启动子活性的影响将单倍型385G-329T和385A-329C构建重组载体,转染细胞并通过双荧光素酶检测显示,在一定浓度内,9-顺式维甲酸对rbp4启动子的活性有明显的促进作用。另外,两种不同基因型重组载体也存在着差异,低浓度(10 nM)时pGL3-385A-329C相比pGL3-385G-329T更为明显。