家蚕蛾溶茧酶的纯化及其基因的克隆与表达研究

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溶茧酶是蚕蛾在羽化的过程中分泌的一种蛋白水解酶,用于水解、软化茧的先端,以便于羽化后的蚕蛾脱茧而出。作为溶茧酶天然底物的蚕丝蛋白是一种优良的高分子材料,在多种领域有着广泛的用途,特别是把丝蛋白水解成水溶性的由特殊氨基酸组成的小分子生物活性肽,在医疗卫生和日用化妆品领域有着重要的应用价值。因此,研究家蚕蛾溶茧酶,不仅对蚕蛾脱茧而出这一生理过程的认识具有重要的理论意义,而且对蚕丝蛋白的进一步开发利用也将产生积极的影响。迄今,前辈学者已对结壳于柞蚕蛾和天蚕蛾下颚表面的溶茧酶结晶颗粒的酶学性质做了较为详细的研究。然而有关家蚕蛾溶茧酶的分离纯化与酶学性质的研究,以及包括柞蚕蛾和天蚕蛾在内的溶茧酶基因克隆与表达的研究至今未见报道。 本研究首先论证了家蚕蛾嗉囊不分泌溶茧酶;然后,分别从中肠与下颚组织蛋白中分离纯化出中肠溶茧酶与下颚溶茧酶。并对下颚溶茧酶基因进行了克隆与表达。此外,对传统的亲和层析方法做了改进,应用改进的亲和层析方法从中肠组织蛋白中分离纯化出另外一种丝氨酸蛋白酶。 主要研究结论如下:前辈学者的研究结果表明,家蚕蛾溶茧酶的可能来源是下颚、嗉囊和中肠,但三者是否具有分泌溶茧酶的能力至今缺乏足够详细的证据。本研究对家蚕蛾下颚、嗉囊和中肠的组织结构分别作了光学显微镜和透射电镜的观察,发现嗉囊不具备分泌器官的形态特征,仅是由壁薄的膜围成的囊状结构,没有观察到分泌细胞及其分泌物。而下颚和中肠具有分泌细胞,而且存在大量的分泌物质。对蛾吐出液进行酶活性检测,发现蛾吐出液除具有酯酶活力外,还具有纤溶酶活力。分别对下颚、嗉囊和中肠的组织蛋白作酯酶活力和纤溶酶活力测定,发现嗉囊组织蛋白不具有这两种酶活力,而下颚和中肠的组织蛋白具有较强的酯酶和纤溶酶活力。
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