猪链球菌（Streptococcus suis，S．suis）属于球菌科、链球菌属，是世界范围内致猪链球菌病最主要的病原。该菌可分为35个血清型，其中猪2型链球菌(SS2)致病性强、流行广，该型亦是临床分离频率最高的血清型。SS2可引起猪脑膜炎以及败血症等疫病，人通过特定的传播途径亦可感染该菌，是一种重要的人畜共患病病原。1991年黄毓茂首次报道在广东省发现猪2型链球菌病疑似病例，1998-1999年江苏省部分地区连续2年在盛夏季节暴发该病，不但造成大量猪死亡，而且有数十人感染致死。2005年在四川资阳及周边地区发生的猪2型链球菌病，引起204人感染发病，导致38人死亡。全球因猪2型链球菌感染已引起300多人死亡。尽管猪链球菌作为严重危害养殖业和危及人类健康的传染病病原，但其致病机理和免疫机理研究却相对滞后。虽然灭活疫苗可以对同型细菌提供保护力，但对其他血清型却缺乏保护力。疫苗的抗原成分不清制约着新型疫苗的开发。因此我们使用免疫蛋白质组学的相关技术开展从SS2细胞壁相关蛋白中鉴定免疫原性蛋白的研究，并进行了从SS2细胞壁免疫原性蛋白中筛选保护性抗原的研究，力图为新型疫苗和诊断试剂的开发奠定基础。与此同时，我们应用比较蛋白质组学对SS2感染前后宿主血清蛋白质的变化开展了研究，以期发现SS2感染的标志物和/或研究SS2的致病机理。现将主要研究结果报告如下：　　 1．SS2细胞壁相关蛋白的免疫蛋白质组学研究　　 利用双向电泳将提取的猪2型链球菌细胞壁相关蛋白进行分离，并同时使用灭活疫苗免疫血清、人工感染康复期血清、临床感染康复期血清以及阴性对照血清与2-D分离的细胞壁相关蛋白进行Western Blot，筛选免疫原性蛋白进行质谱分析鉴定。本研究共从细胞壁相关蛋白中鉴定了34个免疫原性蛋白，其中15个蛋白可以为所有的免疫血清和康复血清所识别，包括目前报道的疫苗候选抗原溶菌酶释放蛋白(MRP)、表面蛋白1(SAO)和重要的粘附蛋白：3-磷酸甘油醛脱氢酶(GapdH)。其他相关研究所鉴定的免疫原性蛋白淀粉酶结合蛋白Bamylase-binding protein B(AbpB)，内皮素转化酶l(Endothelin-convertingenzyme1)和核酸酶（putative5’-nucleotidase）也在本研究中成功筛选鉴定，说明本研究结果可靠。15个蛋白中有9个蛋白的免疫原性在本研究中首次被发现。另外，SecA、自溶酶（autolysin）、次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶(ImpdH)和高亲和力的锌摄取系统znuA前体蛋白(znuA)只为康复血清所识别而不为免疫血清所识别，通过荧光定量PCR分析，发现相对于体外培养的细菌，感染猪脑部细菌的autolysin,ZnuA，ImpdH，和SecA的mRNA均出现了125士38，85±45，10士4和9387±1366倍的增长。表明这些基因在体内（至少在感染猪的脑部）诱导表达。本研究筛选鉴定的免疫原性蛋白无疑为阐明疫苗抗原成分具有重要意义，也为新型疫苗和诊断试剂的研究奠定了基础。　　 2．SS2新型保护性抗原的研究　　 克隆所筛选的29个猪2型链球菌细胞壁免疫原性蛋白，并重组表达纯化。Western Blot验证重组蛋白的免疫反应性。将纯化的重组蛋白与弗氏佐剂乳化后制备疫苗分别免疫小鼠，使用低剂量(5LD50)和高剂量(20LD50)的SS2攻毒检测重组蛋白的免疫保护效果。研究发现，在使用低剂量攻毒时大部分蛋白免疫的小鼠都可以保护，但使用高剂量攻毒时能提供较高保护力的只有HP0197、HP1036和Enolase。ELISA试验证实这些蛋白均可以诱导高水平的抗体，主要为Th2型免疫应答。Real-time PCR表明相对于体外培养的细菌，感染猪脑部细菌的mRNA均上调表达，并且鉴定的保护性抗原均可与Hep-2细胞的表面粘附，表明这些蛋白可能参与了细菌的致病过程。本研究成功从猪2型链球菌细胞壁免疫原性蛋白中筛选到保护性抗原，为新型疫苗的开发奠定了基础。　　 3．SS2感染后血清蛋白质组学的研究　　 血浆/血清蛋白质由于其组成中包含了来源于细胞、组织、器官的蛋白信息，研究疾病与健康状态下血浆蛋白质的差异，将极大促进疾病的早期诊断与治疗监测等方面的进步，也有利于阐明疾病的发生机制，寻找有效的治疗方法，发现有效疫苗及新的药物靶标。本研究通过血清比较蛋白质组学的方法比较SS2感染前后血清中蛋白质的变化，发现了9个最具生物学意义的差异表达蛋白点，进行质谱分析，共鉴定了其中5个点（4个蛋白），分别为上调表达的α1-抗胰蛋白酶、血清珠蛋白、补体C4，以及下调表达的载脂蛋白AI。本研究提示了对这些血清蛋白的研究将促进SS2致病机制的解释，对SS2的诊断、治疗研究都具有一定意义。