论文部分内容阅读
本论文以怀牛膝(Achyranthes bidentata Blume)和巴戟天(Morinda officinalis How)两种补肾壮骨类中药为研究对象,对分离纯化所得的均一糖聚物进行一级结构研究,初步考察其高级结构,并对其抗骨质疏松活性进行系统的评价。通过水提醇沉法结合碱提醇沉法得到怀牛膝和巴戟天的3种粗糖聚物。依次利用离子交换柱层析和凝胶柱层析对粗糖聚物进行分离纯化,并结合各种波谱分析手段和一系列的化学方法对纯化所得的均一糖聚物进行一级结构解析。此外,利用糖皮质激素诱导的斑马鱼骨质疏松模型对精糖聚物进行抗骨质疏松活性评价。联合使用离子交换色谱柱DEAE-52和凝胶色谱柱Sephacryl S-100对粗糖聚物ABPB、MO50、MOPB进行系统的分离纯化,最终得到6个精糖聚物,分别为ABPB-1、ABPB-2、ABPB-3、MOW50-1、MOP50-2、MOPB-2。比旋光度法和高效凝胶渗透色谱(HPGPC)结果显示6个糖聚物均为均一糖聚物,其分子量分别为2319 Da、25680Da、77231 Da、1810 Da、2503 Da、94994 Da。通过完全酸水解,结合高效液相色谱(HPLC)和离子色谱对6个均一糖聚物进行单糖组成分析,综合单糖组成、红外光谱、GC-MS、NMR分析结果对6个均一糖聚物进行一级结构鉴定,结果表明MOW50-1和MOP50-2均为菊淀粉型果聚糖,而ABPB-1为混合型果聚糖。ABPB-2、ABPB-3和MOPB-2均为酸性杂多糖。通过刚果红实验、圆二色谱、扫描电镜分别对6个均一糖聚物的高级结构进行初步考察,结果显示6个均一糖聚物均不存在三股螺旋结构,且在扫描电镜观察下呈现不同的形态,这可能与其分子量、单糖组成等基本结构特征的不同有关。目前,国内外相关文献中均未见此6个均一糖聚物的结构报道。利用糖皮质激素泼尼松龙对受精后3天(3-dpf)的斑马鱼幼鱼进行诱导,成功建立斑马鱼骨质疏松模型。以斑马鱼幼鱼头部骨骼的相对荧光强度为检测指标,对ABPB-3和ABW50-1的抗骨质疏松活性进行系统的评价。结果显示怀牛膝精糖聚物ABW50-1和ABPB-3均能显著提高模型斑马鱼幼鱼头骨的相对荧光强度,活性具有浓度依赖性,且未显示出毒性,说明ABPB-3及ABW50-1对糖皮质激素诱导的骨质疏松症具有良好的治疗效果。