血管生成抑制剂硝羟喹啉衍生物的设计、合成及药理活性研究

来源 :徐州医学院 徐州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qq635306700
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文章主要从以下几方面进行了论述。  第一部分硝羟喹啉衍生物的设计与合成。  目的:在前期研究的基础上设计、合成新的硝羟喹啉衍生物。  方法:将8-羟基喹啉置于浓盐酸和37%甲醛的体系中,持续通HCl气体10h,得到5-氯甲基-8-羟基喹啉(a1),然后和苯胺、吡啶胺等芳香胺反应得到一系列化合物。其中化合物B6和B7的合成过程不同,通过将5-氯甲基-8羟基喹啉改变成5-胺甲基-8羟基喹啉,然后和4-三氟甲基苯甲酰氯、4-三氟甲基苯磺酰氯反应得到目标化合物B6和B7。纯化后通过核磁共振波谱(nuclear magnetic resonance,NMR)扫描鉴定其结构,通过高效液相色谱(high-performance-liquid chromatography,HPLC)检测其纯度,控制纯度>95%。用于初步药理研究的化合物A6并通过红外光谱(infrared spectra,IR)扫描、紫外光谱扫描(utlraviolet,UV),液相-串联质谱(liquid chromatograph-mass spectrometer,LC-MS)进一步鉴定化合物的结构,并通过高效液相色谱仪检测化合物的纯度,控制纯度>99%。  结果:合成化合物通过HPLC测试纯度均大于95%,并通过NMR扫描鉴定结构的正确性。通过UV扫描、IR扫描、LC-MS测试进一步验证化合物A6结构正确,并通过HPLC测试纯度为99.05%。  结论:合成设计思路正确,合成的硝羟喹啉衍生物纯度合格,可以用于药理活性初筛实验。  第二部分硝羟喹啉衍生物的活性初筛及化合物A6的初步药理活性研究。  目的:将合成的衍生物进行活性初筛,筛选出活性较好的化合物A6;在此基础上,进一步对化合物A6进行初步的药理活性研究。  方法:通过[3H]-thymidine掺入法实验考察已合成硝羟喹啉衍生物对HUVEC增殖能力的影响,筛选活性较好化合物,并根据筛选结果选择化合物A6进行初步的药理活性研究。常规培养HUVEC细胞,采用MTT实验考察化合物A6对细胞活力的抑制作用。设定Control组(DMSO,20μmol/L)、Nitroxoline组(Nitroxoline5μmol/L)、低剂量组(2.5μmol/L)、中剂量组(5μmol/L)和高剂量组(10μmol/L)5个组别进行研究。给予处理培养24h后,光镜下观察化合物A6对HUVEC形态的影响;采用DAPI染色法观察给予化合物A6后HUVEC细胞核的变化情况;Annexin V/PI双染法考察化合物A6诱导HUVEC凋亡的作用;Western blot法检测HUVEC内caspase-3/cleaved caspase-3的蛋白表达情况;Brdu增殖试剂盒测试化合物A6对HUVEC增殖能力的影响。  结果:  1.[3H]-thymidine掺入法实验进行活性初筛  [3H]-thymidine掺入法实验筛选的第一批化合物中化合物A6活性较好,对HUVEC细胞24h的IC50值为1.70μmol/L;第二批化合物中化合物B5、B9、B4、B10活性较好,其24 h的IC50值分别为0.679μmol/L、0.644μmol/L、1.03μmol/L、1.51μmol/L。  2.不同处理后,HUVEC细胞形态的变化  Control组单个细胞形态正常,轮廓清晰,多个细胞呈现“铺路石”状排列,中、高剂量组和Nitroxoline组细胞有部分变圆、浮起、细胞间接触变松。  3.不同处理后,DAPI染色观察HUVEC细胞核的变化  Control组细胞核染色质均匀,核形完整;中、高剂量组和Nittoxoline细胞核内染色质出现不同程度的凝集,核形不完整,核内出现高亮的颗粒物质。  4.不同处理后,Annexin V/PI双染法流式细胞术考察HUVEC凋亡情况  与Control组相比,中、高剂量组凋亡率明显提高(P<0.01);与Nitroxoline组相比,高剂量组凋亡率明显提高(P<0.05)。  5.不同处理后,Western blot法检测HUVEC内caspase-3/cleaved caspase-3蛋白表达情况  与Control组相比,高剂量组caspase-3的蛋白表达量显著降低(P<0.05),中、高剂量组cleaved caspase-3的蛋白表达量显著升高(P<0.05; P<0.01),且中、高剂量组与Nitroxoline组比较,cleaved caspase-3的蛋白表达含量显著增高(P<0.05;P<0.01)。  6.Brdu增殖实验考察不同处理后,HUVEC增殖情况  与Control组相比,Nitroxoline组、低、中、高剂量组均能抑制HUVEC增殖(P<0.05,P<0.01),且高剂量与Nitroxoline组相比,抑制作用明显增强(P<0.05)。  结论:合成的硝羟喹啉衍生物中化合物A6、B5、B9、B4、B10活性较好,且化合物A6能够抑制HUVEC细胞增殖,并能诱导其产生凋亡。
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