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伪狂犬病是一种由伪狂犬病病毒引起的可感染多种动物的急性传染病,给国内养猪产业带来了巨大的经济损失。虽然猪伪狂犬病的疫苗免疫在该病的控制过程中起了重要作用,但近些年猪伪狂犬病在国内大型猪场仍时有发生。因此,本课题以国内某受伪狂犬野毒感染而生产成绩受到影响的规模化猪场为研究对象,通过流行病学调查、实验室检测、免疫程序调整、制定综合防控措施帮助猪场来控制该病的流行,解决猪场实际问题。1、流行病学调查本研究通过对该场现场发病情况进行初步统计分析,首先发病猪群是育肥猪主要表现出呼吸道症状,随后出现妊娠母猪流产和产房仔猪死亡问题、根据临床发病特点和剖检症状判定为伪狂犬感染。为了详细了解伪狂犬病毒在该场的传染源分布情况和在种猪群及育肥猪群传播规律,采用荧光定量的检测方法对整个猪场进行了全面的筛查(包含各阶段猪群、栏舍、环境、饲料、水源、粪便等采样)。结果显示育肥猪带毒量最高,主要集中在60-100日龄33.3%(10/30),随着日龄的增长阳性检出率逐渐降低,100-150日龄PRV病原阳性检出率为10.3%(3/29);150-210日龄PRV病原阳性检出率为5.7%(2/35)。该场母猪群PRV病原阳性检出率从断奶后、怀孕前期至怀孕中期逐渐升高其阳性检出率分别为15.6%(5/32)、19.5%(7/36)和22.5%(7/31),从怀孕后期至哺乳期的阳性检出率则出现逐渐下降的趋势,分别为17.2%(5/29)和16.7%(6/36)。研究结果证明了该场伪狂犬病的发病风险点主要集中在妊娠母猪中期和育肥60-100日龄阶段。2、实验室检测为查明该猪场引起育肥猪喘气、新生仔猪腹泻及妊娠母猪流产的主要病因,本研究采集40份病料(育肥猪8份,仔猪16份,流产胎儿16份)采用荧光定量PCR方法对该规模化猪场临床发病猪样品进行病原检测,该猪场PRV病原阳性率达80%和PCV2阳性率为30%,结合临床表现,可判断PRV是引起该猪场发病的主要原因。随后对从该猪场检测到的PRV野毒进行了g E基因的扩增、测序,并进行了遗传进化分析。结果表明,该规模化猪场中流行的PRV野毒属于亚洲分离株基因2.3型变异毒株,与最新分离的SMX2012、GD-FS-2014、GD-JM-2015、He N1-2012、HN1201-2012、HNX-2012、HLJ8-2013毒株同源性最高,高达99.8%,而目前使用的该场使用的伪狂犬疫苗Bartha-K61株是属于欧美经典毒株基因1型,同源性只有97.4%,相对较差。我们采集该猪场各生产阶段经产母猪群、保育猪群和育肥猪群进行了PRV-g E抗体检测,结果显示,经产母猪群、保育猪群和育肥猪群的PRV-g E抗体阳性率分别高达30.5%(175/574)、15.4%(44/286)和25.5%(83/324)。在检测PRV-g E抗体同时随机抽取各个阶段猪群样品做中和抗体检测,使用该场分离的PRV野毒毒株作为中和抗体试验的检测病毒。实验结果表明,经产母猪血清中和抗体阳性率为54.9%(50/91);保育猪猪群血清中和抗体阳性率为38.0%(38/100);育肥猪猪群血清中和抗体阳性率为52.8%(56/106)。猪场各阶段猪群中血清中和抗体水平整体均偏低,中和抗体阳性率均在60%以下。3、免疫程序调整及效果分析该猪场伪狂犬病的流行和发病对生产成绩产生了重要的影响,根据实际生产需要,对该猪场伪狂犬病疫苗免疫程序进行了重要调整,疫苗选择依据猪场猪伪狂犬病毒野毒遗传进化关系,选择亲缘关系更近,同源性接近的基因2型猪伪狂犬病基因缺失活疫苗(HB-2000株)和猪伪狂犬病灭活疫苗(鄂A株)做紧急免疫。通过对该猪场伪狂犬病免疫程序进行优化,并对优化前后的经产母猪、保育猪和育肥猪的PRV中和抗体和PRV病原阳性率进行比较分析,发现优化后各阶段猪群的中和抗体阳性率均显著升高(P<0.05)。优化前为54.9%(50/91),38.0%(38/100)和52.8%(56/106);优化后为88.0%(88/100),80%(80/100)和75.0%(75/100)。各猪群PRV野毒阳性率均显著降低(P<0.05)(优化前30.5%(175/574),15.4%(44/286)和25.6%(83/324),优化后为20.3%(81/400),7.8%(22/282和9.2%(30/326)。本研究还对免疫程序优化前后的相关生产数据和临床指标进行了统计分析。结果表明,优化后母猪流产率、母猪产死胎率、产房仔猪死亡率和育肥猪死淘率,分别由优化前的13.2%(25/190),12.5%(25/200),10.3%(204/1981)和8.4%(130/1550)下降为2.1%(4/190)、3.6%(7/194)、4.7%(89/1894)和3.3%(50/1550),差异显著(P<0.05);生产成绩方面,优化后的PSY和MSY由优化前的20.3和18.7提高到22.2和21.5,差异显著。免疫程序优化对该猪场生产成绩的提高具有显著作用。4、综合防控措施免疫程序调整后,规范生物安全制度对疾病防控有重要作用,因此,针对该猪场提高以下几个方面的生物安全措施。第一,加强外部生物安全管理,如猪群、人员、车辆、物质方面。第二,制定场内生物安全管理制度,完善带猪消毒和空栏消毒制度。第三,强化饲养管理,坚持全进全出,实施批次化生产管理。第四,规范疫苗免疫操作,严格按照调整的免疫程序进行免疫。第五,定期开展生物安全知识专题培训,提高生产技术人员对疾病的认识。综上所述,通过对该规模化猪场伪狂犬病流行病学调查,依靠实验室血清学和病原学检测方法,分析PRV野毒在猪场环境和猪群中的分布与感染情况,同时摸清了在生产母猪和育肥猪不同阶段的排毒规律,确定了该场的发病风险点。为解决该场生产实际问题,根据遗传进化关系分析筛选针对性的疫苗,及时调整免疫程序,制定综合防控措施,最终实现了对该猪场猪伪狂犬病的防控,显著提高了该猪场的生产成绩。