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研究目的1.探讨与形态结合的M-FISH技术在辅助纤维支气管镜(fiberoptic bronchoscopy, FOB)细胞学诊断肺癌的价值。2.采用肺癌相关细胞学标本检测EGFR和k-ras基因突变的可行性。材料与方法1.选取7、8及17号染色体特异性着丝粒探针(CEP7、CEP8和CEP17),对69例中国医学科学院肿瘤医院病理细胞室FOB细胞学标本进行与细胞学形态学相结合的M-FISH检测。2.收集50例中国医学科学院肿瘤医院病理细胞室FOB细胞学标本、细针穿刺(fine-needle aspiration, FNA)标本和胸水(pleural effusion, PLE)标本,采用PCR技术扩增EGFR基因18-21外显子和k-ras基因12、13号密码子,然后对扩增片段进行测序和分析。结果1.与细胞学形态学相结合的M-FISH检测(1)在癌病例中,CEP7、CEP8和CEP17的FISH检测阳性率分别为50.0%(16/32)、80.8.%(21/26)和65.4%(17/26),CEP8与CEP7的阳性率有明显差异(P=0.015),而CEP8与CEP17,CEP7与CEP17的阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。在可疑癌病例中,CEP7、CEP8和CEP17的FISH检测阳性率分别为46.6%(7/15)、66.7%(10/15)和58.8%(7/12)。在非典型病例中,CEP7、CEP8和CEP17的FISH检测阳性率分别为20.0%(1/5)、33.3(2/6)和25.0%(1/4)。三种探针在可疑癌和非典型两组病例间的差异无统计学意义(P>0.05)；三种探针在癌与可疑癌两组病例间的阳性率差异也无统计学意义(P>0.05)；所有正常细胞均未见染色体改变。(2)CEP7、CEP8和CEP17三种探针在腺癌中的阳性率均高于在鳞癌和小细胞癌的阳性率,但仅CEP8探针在腺癌中阳性率与其在小细胞癌的阳性率差异有统计学意义(P=0.044)。(3)FOB细胞学诊断肺癌的敏感性为54.1%(33/61),若以CEP7、CEP8、CEP17任意一个探针阳性为M-FISH阳性,细胞学结合M-FISH可使诊断敏感性提高至80.3%(49/61),且不降低细胞学诊断的特异性(100.0%)。2. EGFR和k-ras基因突变检测(1)50例细胞学标本中,DNA提取的满意率为86.0%(43/50),其中42例有特异性PCR扩增产物可以进行测序。(2) EGFR基因总突变率为33.3%(14/42)。其中第19外显子突变率为16.7%(7/42),第20外显子突变率为4.8%(2/42),第21外显子突变率为11.9%(5/42),未检出第18外显子突变。EGFR19和21外显子突变占EGFR突变总数的85.7%(12/14),显著高于EGFR20外显子突变(P=0.03)。(3) EGFR女性突变率47.8%(11/23)显著高于男性(15.8%,3/19)(P=0.028)；非吸烟患者突变率为53.3%(8/15)显著高于吸烟患者(22.2%,6/27)(P=0.040)；腺癌患者突变率为38.7%(12/31),3例非肺癌患者未见EGFR基因突变。(4) k-ras基因突变率为4.8%(2/42),均为第12号密码子替代突变。(5)未发现EGFR基因突变与k-ras基因突变共存于同一病例。结论1.FOB细胞学液基薄片上可以建立与细胞形态相结合的M-FISH技术。FOB细胞学诊断的癌细胞、可疑癌细胞及非典型细胞均可发生7、8和17号染色体多体,此技术可能成为辅助FOB细胞学提高肺癌诊断敏感性的有效途径。2.采用细胞学标本进行EGFR和k-ras基因突变检测方法可行、结果可靠,对无法获得组织学标本的肺癌患者可以尝试采用细胞学标本进行检测。