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研究背景慢性肾脏病(Chronic Kidney Disease, CKD)已经成为严重威胁人类健康并消耗大量卫生资源的常见慢性疾病。早期诊断并进行有效的早期干预对于延缓CKD进展尤为重要。CKD的发生机制十分复杂,可能与氧化应激、内皮功能紊乱、肾素-血管紧张素系统激活、转化生长因子分泌和脂质代谢紊乱等有关。丹参、红花具有改善血液动力学、改善血管内皮紊乱、抗氧化应激的功能,已广泛应用于心血管疾病的治疗,但其对CKD的作用及其机制尚缺乏相关研究和探讨。故本课题组旨在通过动物实验研究探讨丹红对早期CKD大鼠肾脏病变的影响及相关机制,希冀为CKD的治疗提供有益的指导。目的通过单侧肾切除的方法建立早期CKD大鼠动物模型,探讨丹红对早期CKD大鼠肾脏病变的影响及相关机制。方法采用右肾切除术制备SD大鼠早期CKD模型。将40只SD大鼠随机分成A组(假手术组)、B组(CKD组)、C组(CKD+丹红组)、D组(CKD+氯沙坦钾组),每组10只。A、B组均给予生理盐水8ml/kg灌胃,生理盐水7ml/kg腹腔注射,各每日1次,C组给予生理盐水8ml/kg灌胃,丹红注射液7ml/kg腹腔注射,各每日1次,D组给予氯沙坦钾20mg/kg(即8ml/kg氯沙坦钾混悬液)灌胃,生理盐水7ml/kg腹腔注射,每日1次。术后第12周处死大鼠,采集尿标本、血标本、肾组织。检测24小时尿蛋白定量、血清肌酐(serum creatinine,Scr)、尿酸(uric acid, UA)、胱抑素C(Cystic C, CysC)、甘油三酯(Triglyceride,TG)、胆固醇(Cholesterol, CHOL)、高密度脂蛋白(High Density Lipoprotein Cholestral,HDL-C)、低密度脂蛋白(Low Density Lipoprotein Cholesteral, LDL-C);考马斯亮蓝法检测肾组织匀浆蛋白浓度,硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid, TBA)法检测丙二醛(Malondialdeyde, MDA)含量,羟胺法检测总超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase, SOD)活力,化学比色法检测一氧化氮合成酶(Nitric Oxide Synthase, NOS)活力,ELISA(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)方法检测肾组织匀浆内皮素-1(Endothelin-1, ET-1)、血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ, AngⅡ)、转化生长因子-β(Transforming Growth Factor-β, TGF-β)水平；HE、PAS、PASM、Masson染色观察肾组织病理改变,观察肾小球硬化、肾小球基底膜病变、肾间质纤维化的程度并进行半定量分析；用免疫组化技术测定肾脏组织转化生长因子-β1(Transforming Growth Factor-β1,TGF-β1)表达情况。结果1、各组均有1只大鼠死亡。2、与A组相比,B组实验后肾脏重量(1.478±0.273g vs2.356±0.246g,P<0.01).肾脏系数(0.325±0.053%vs0.662±0.088％,P<0.01).胱抑素C水平(0.256±0.053mg/1vs0.389±0.93mg/l,P<0.01).24小时尿蛋白定量(5.422±2.903mg/d vs160.158±34.907mg/d,P<0.01)显著增加,血肌酐、内生肌酐清除率、血尿酸水平未见显著性差异(P>0.05)。与B组相比,C组大鼠实验后肾脏重量(2.356±0.246g vs1.967±0.415g,P<0.01).肾脏系数(0.662±0.088%vs0.457±0.109%,P<0.01).24小时尿蛋白定量(160.158±34.907mg/d vs34.578±11.839mg/d,P<0.01)显著减少。C、D两组间上述指标无显著差异(P>0.05)。3、光镜下,A组大鼠肾脏病理未见肾小球、肾小管及肾间质病变。B组大鼠肾脏病理可见明显的肾小球硬化、肾间质纤维化、肾小球基底膜增厚,肾小球硬化积分、肾小球基底膜厚度积分、肾间质纤维化积分及总积分较A组均有显著上升(P<0.01)。C组大鼠肾小球硬化、肾间质纤维化、肾小球基底膜增厚等病变较B组减轻,肾小球硬化积分、肾小球基底膜厚度积分、肾间质纤维化积分及总积分较B组有显著下降(P<0.01)。D组大鼠肾脏病理肾小球硬化积分、肾间质纤维化积分、肾小球基底膜厚度积分及总积分较B组有显著下降(P<0.01),与C组比较无显著差异(P>0.05)。4、与A组相比,B组肾皮质中SOD活性显著下降(122.558±18.733U/mgprot vs72.834±8.855U/mgprot,P<0.01),MDA含量显著升高(对数：0.763±0.219vs1.095±0.236, P<0.01).与B组相比,C组肾皮质中SOD活性显著升高(72.834±8.855U/mgprot vs135.070±63.721U/mgprot,P<0.01),(对数：1.095±0.236vs-0.031±0.598,P<0.1),D组大鼠肾皮质中SOD活性显著升高(72.834±8.855U/mgprot vs125.233±30.284U/mgprot,P<0.01),MDA含量显著下降(对数：1.095±0.236vs-0.194±0.515,P<0.01)。C、D两组间上述指标无显著性差异(P>0.05)。5、与A组相比,B组肾皮质中ET-1含量(21.657±6.421ng/L vs66.716±6.704ng/L, P<0.01).TNOS活力(-0.123±0.147U/mgprot vs1.370±0.403U/mgprot, P<0.01).iNOS活力(对数：-1.210±0.523vs0.607±0.394,P<0.01)显著上升。与B组相比,C组肾皮质中ET-1含量(66.716±6.704ng/L vs26.542±7.193ng/L, P<0.01).TNOS活力(1.370±0.403U/mgprot vs0.312±0.519U/mgprot,P<0.05). iNOS活力(对数:0.607±0.394vs-1.094±0.555,P<0.01)显著降低,D组肾皮质中ET-1含量(66.716±6.704ng/L vs29.883±9.283ng/L,P<0.01)、TNOS活力(1.370±0.403U/mgprot vs0.264±0.626U/mgprot,P<0.01).iNOS活力(对数：0.607±0.394vs-8.695±.654,P<0.01)显著降低。C、D两组间上述指标无显著性差异(P>0.05)。6、与A组比较,B组肾皮质中AngII浓度显著升高(102.706±11.448ng/L vs263.255±10.730ng/L,P<0.01).与B组比较,C组肾皮质中AngII浓度明显下降(263.255±10.730ng/L vs108.604±7.231ng/L,P<0.01),D组肾皮质中AngII浓度明显下降(263.255±10.730ng/L vs103.615±10.608ng/L,P<0.01).C.D两组间AngII浓度无显著性差异(P>0.05)。7、与A组相比,B组肾皮质组织匀浆TGF-β浓度显著升高(185.701±4.609ng/L vs272.364±34.858ng/L,P<0.01).与B组相比,C组肾皮质组织匀浆TGF-β浓度显著降低(272.364±34.858ng/L vs196.862±35.519ng/L,P<0.01),D组肾皮质组织匀浆TGF-β含量显著降低(272.364±34.858ng/L vs202.881±42.743ng/L,P<0.01).C.D两组间TGF-β浓度无显著性差异(P>0.05)。8、肾脏组织TGF-β,免疫组化结果显示：四组大鼠肾脏的肾小管上皮细胞胞质、肾间质细胞、肾小球系膜细胞均可见TGF-β,的棕黄色颗粒,且以B组染色最深。与A组相比,B组阳性面积百分比明显增加(4.574±1.074%14.632±1.291%,P<0.01)。与B组相比,C组TGF-01阳性面积百分比显著减少(14.632±1.291%vs11.239±0.784%,P<0.01),D组TGF-β1阳性面积百分比显著减少(14.632±1.291%vs7.071±1.113%,P<0.01)。C、D两组间TGF-β1阳性面积百分比无显著性差异(P>0.05)。9、与A组相比,B组血清CHOL含量(1.500±0.332mmol/l vs4.544±2.587mmol/l,P<0.01)、HDL-C含量(0.859±0.344mmol/l vs2.318±1.779mmol/l, P<0.05).LDL-C含量(0.252±0.78mmol/l vs0.931±0.551mmol/l,P<0.01)明显升高。与B组相比,C组血清CHOL含量(4.544±2.587mmol/l vs1.667±0.781mmol/l,P<0.01)、HDL-C含量(2.318±1.779mmol/l vs0.827±0.352mmol/l, P<0.01)、LDL-C含量(0.931±0.551mmol/l vs0.331±0.129mmol/l,P<0.01)显著下降,D组血清CHOL(4.544±2.587mmol/l vs2.213±1.621mmol/l,P<0.05). LDL-C含量(0.931±0.551mmol/l vs0.420±.407mmol/l,P<0.05)显著下降(P<0.01)。C、D两组间血清CHOL、HDL-C、LDL-C含量无显著性差异(P>0.05)。结论本研究用右肾切除12周的方法,成功建立早期CKD大鼠模型。丹红可通过抑制氧化应激、改善内皮功能、抑制肾素-血管紧张素系统活化、下调TGF-β的分泌和表达、调节脂质代谢紊乱等机制,减轻早期CKD大鼠肾小球硬化、肾间质纤维化等病理损害,进而起到延缓CKD进展的作用。