羧甲基可德胶多糖的功能化研究及应用

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多糖广泛存在于动物、植物和微生物中,作为生命物质的组成成分之一,对维持生命活动起到至关重要的作用。葡聚糖是多糖家族中最重要的成员之一,其中β-1,3-葡聚糖的生物活性已被广泛认可。可德胶(Curdlan)是一种微生物发酵的直链型β-1,3-葡聚糖,由于其独特的凝胶特性,可广泛应用于食品、生物医药等领域。但可德胶水溶性差的特性在某种程度上限制了其应用范围,而经过羧甲基化改性后的可德胶(CMc)则具有良好的水溶性,且具备更显著的生物活性,如抗肿瘤活性和免疫增强活性。本文基于CMc良好的水溶性和生物活性,对其进行了进一步的功能化研究及应用拓展,在物理水凝胶的制备、稳定酪蛋白胶束和纳米银颗粒的制备方面进行了系统研究,具体内容如下:高分子水凝胶具有三维网络结构和良好的溶胀性能,可作为药物缓释控释制剂。化学凝胶由于涉及有毒交联剂及有机溶剂的使用,可能具有潜在的细胞毒性。本论文基于药物缓释载体的设计,首先采用各种方法,如冷冻解冻法、主客体络合法和溶胶凝胶法制备了三种新型CMc水凝胶,并进行了载药释放研究。由于CMc具有良好的生物活性,该物理凝胶的制备避免了化学交联剂的使用,在生物医药领域可具有更广泛、安全的应用。具体工作为:1)首先通过冷冻解冻法制备了CMc物理水凝胶。研究发现,调酸对于CMc冷冻解冻凝胶的形成至关重要,当溶液pH降低到2.4以下才能形成冷冻解冻凝胶;流变学和SEM研究表明,CMc浓度、冷冻解冻循环次数、冷冻时间对凝胶强度和凝胶网络结构有重要影响,随CMc浓度和循环次数的增加及冷冻时间的延长,凝胶强度增大,凝胶内部网络结构愈紧密,其中冷冻解冻循环次数对凝胶性能影响最大;通过FTIR和XRD手段,并结合对比PVA冷冻解冻凝胶的性质,阐明了CMc形成冷冻解冻凝胶的主要原因是由于分子间的氢键作用,冷冻过程促进了分子链段的相互聚集,调酸后CMc分子链上-COOH、-OH基团间的氢键作用是凝胶三维网络结构的物理交联点。此外,以5-氟尿嘧啶为模型药物,在模拟肠胃环境的缓冲溶液中进行了载药释放研究,结果表明该凝胶在pH=1.2的HCl缓冲溶液中的释放速率比pH=7.2的PBS缓冲溶液缓慢,说明该凝胶适合作为结肠类药物载体基质。2)利用β-环糊精和金刚烷的主客体络合作用,将β-环糊精和金刚烷分别接枝到CMc上,成功制备了CMc主客体凝胶。该类凝胶强度受混合溶液中β-环糊精与金刚烷摩尔比的影响,当摩尔比为1时凝胶强度最大;通过流变学动态温度扫描表征了该凝胶的温度敏感性,结果表明,在45oC左右凝胶转变为溶胶,并且该过程具有热可逆性;2D-NOESY研究表明,凝胶的形成是由于金刚烷与环糊精间的包结络合作用。此外,以牛血清蛋白作为模型药物进行了载药释放研究,发现药物释放速率与β-环糊精和金刚烷的摩尔比有关,随摩尔比的增加而减慢,当摩尔比为1时释放速率最慢。3)利用溶胶凝胶法制备了四(2-羟乙基)正硅酸酯(THEOS)/CMc杂化凝胶,采用流变学、FTIR、SEM等表征手段研究了CMc浓度、THEOS浓度及温度对溶胶凝胶转变动力学过程的影响,以及在该过程中凝胶内部结构的演变,凝胶结构-性能关系。结果表明,凝胶强度随THEOS浓度增加而增大,而随CMc浓度的增加而减弱;随CMc浓度的增加,凝胶化时间先缩短后增大,凝胶结构中溶胶粒子的分布从无序变为有序,再变为无序。当CMc浓度小于1%时,由于CMc分子链上的羟基与溶胶粒子发生氢键作用,CMc作为模版诱导了溶胶粒子的聚集,使得凝胶内部结构有序化,此时CMc具有加速溶胶凝胶转变的催化作用;而当CMc浓度大于1%时,由于聚阴离子多糖CMc与带负电的溶胶粒子间的静电排斥增强,导致催化作用减弱,凝胶内部结构无序化。此外,以牛血清蛋白作为模型药物进行了载药释放研究,结果表明牛血清蛋白释放速率受控于THEOS的浓度,随THEOS浓度的增加而减慢。本文还基于羧甲基可德胶(CMc)与羧甲基纤维素(CMC)均为水溶性的直链型聚阴离子葡聚糖,分子结构类似,仅糖苷键链接方式不同的特点,开展了CMc在酸性条件下稳定酪蛋白胶束的研究,并与CMC的作用进行了详细对比,阐明了分子结构参数与体系稳定性的关系以及CMc稳定全脂酸性乳饮料的机理。结果表明CMc稳定体系粒径小于CMC稳定体系粒径;维持体系稳定所需CMc的浓度大于CMC,CMc稳定效果低于CMC。从分子柔顺性角度,利用蠕虫状链模型计算了两种多糖的持续长度,结果表明CMc持续长度小于CMC,说明CMc分子链更柔顺,在酪蛋白表面吸附更紧密,但CMc亦能有效稳定酪蛋白胶束。通过直观评价、沉降量、粒径及zeta电位测量发现,在酸性乳体系中CMc不仅能阻止蛋白沉降也能防止脂肪上浮,可作为酸性乳饮料的稳定剂。纳米银颗粒不仅具有抗菌性,由于其量子尺寸效应,表面界面效应以及宏观量子隧道效应还显示出优良的光电学、热学、磁学以及化学等方面的性质,因此在催化、光电器件、表面增强拉曼散射(SERS)、生物传感器等方面有着广泛的应用。本论文采用了一种绿色合成方法,即采用CMc作为稳定剂和还原剂,在紫外光辐照条件下成功制备了纳米银颗粒。所制得的纳米银颗粒尺寸和形貌可通过改变CMc的浓度进行调控。通过zeta电位、TEM、UV-vis、FTIR等手段对CMc的作用机理进行了探讨。结果表明,CMc能催化纳米银颗粒的生成,在光照过程中与银离子或银颗粒络合,起到电荷转移的作用,有利于银颗粒的进一步形成。研究还发现,所得CMc稳定的纳米银颗粒具有明显的表面拉曼增强效果。
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