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目的:脱氢乙酸钠(Sodium dehydroacetate,DHA-S)作为食品添加剂和饲料防霉剂在食品和饲料等领域被广泛应用。但高剂量DHA-S可能导致大鼠血液中凝血酶及凝血酶原激活物形成的时间明显延长,有出血倾向。本课题组前期研究中也发现较高剂量(150 mg/kg和200 mg/kg)DHA-S可引起大鼠和家兔的主要脏器出现明显出血,血清中VK1水平显著降低。但目前有关DHA-S凝血障碍的作用机制研究较少。本文通过给予大鼠高剂量的DHA-S,测定DHA-S对凝血指标凝血酶原时间(Prothrombin time,PT)和活化部分凝血活酶时间(Activated partial thromboplastin time,APTT)的影响,对肝脏、肺脏、睾丸中的DHA-S含量,以及肝脏、肺脏、睾丸和卵巢中维生素K环氧化物还原酶(Vitamin K 2,3-epoxide reductase,VKOR)两种亚型维生素K 2,3-环氧化物还原酶复合物1(Vitamin K 2,3-epoxide reductase complex subunit 1,VKORC1)和维生素K 2,3-环氧化物还原酶复合物1-样蛋白1(Vitamin K 2,3-epoxide reductase complex subunit 1-like protein 1,VKORC1L1)的表达水平的影响,研究DHA-S引起大鼠凝血障碍的VKORC1/VKORC1L1机制。方法:Wisrar大鼠以20mg/kg DHA-S灌胃连续给予,分别在给予3d、5d、7d、9d、11d、14d、17d和21d,以及在停止给予DHA-S不同时间后,采集血液测定PT和APTT;HPLC法检测大鼠不同组织中DHA-S的含量,免疫组化、Western Blot方法检测组织中VKORC1和VKORC1L1的蛋白表达水平,qRT-PCR方法检测组织中Vkorc1、Vkorc1l1的mRNA水平。分析PT、APTT与VKORC1和VKORC1L1表达之间的相关性;不同性别相同组织中VKORC1和VKORC1L1表达的差异。结果:不同性别大鼠经灌胃给予200 mg/kg DHA-S后,随着处理天数的不断增加,PT、APTT值均有显著延长(P<0.05),且母鼠延长时间高于公鼠。与对照组相比,DHA-S处理组公、母鼠PT值分别为对照组的1.11～1.48倍和1.12～2.02倍,APTT值分别为对照组的1.14～1.37倍和1.20～1.70倍。HPLC法测定处理组大鼠各组织中DHA-S含量,在DHA-S处理3～9d期间,母鼠肝脏、肺脏组织中的DHA-S含量均显著高于公鼠(P<0.05),分别是公鼠的1.2～3.0倍和2.5～5.5 倍。200 mg/kg DHA-S剂量连续给予公鼠14 d或21 d,休药不同时间后,肝脏、肺脏、睾丸内的DHA-S含量均显著下降(P<0.05),DHA-S在各组织内的残留量为肺脏>肝脏>睾丸。qRT-PCR检测DHA-S处理组大鼠后,肝脏、肺脏、睾丸、卵巢中Vkorc1/Vkorc1l1的mRNA表达均显著降低(P<0.05)。与正常组比较,DHA-S处理9d时,公鼠肝脏、肺脏、睾丸中Vkorc1、Vkorc1l1表达量分别为0.69、0.57、0.75和0.75、0.48、0.72倍;母鼠中肝脏、肺脏、卵巢中Vkorc1、Vkorc1l1表达量分别为0.33、0.27、0.55和0.62、0.46、0.68倍。DHA-S处理对母鼠Vkorc1mRNA抑制更明显。免疫组化及Western Blot检测,DHA-S处理后大鼠肝脏、肺脏、睾丸及卵巢组织中VKORC1和VKORC1L1的表达,与正常对照组相比显著降低(P<0.05)。200mg/kg DHA-S连续给予大鼠11 d后,各组织内VKORC1和VKORC1L1蛋白的阳性表达明显减少。Western Blot检测处理组大鼠组织中VKORC1和VKORC1L1的蛋白表达水平显著低于正常对照组(P<0.05)。DHA-S处理9d时,公鼠肝脏、肺脏及睾丸中VKORC1/VKORC1L1的表达量分别为对照组的0.15/0.33、0.64/0.51、0.34/0.23倍;母鼠肝脏、肺脏及卵巢中VKORC1/VKORC1L1 的表达量分别为对照组的 0.12/0.56、0.23/0.30、0.42/0.13 倍。DHA-S对肝脏中VKORC1的抑制强于VKORC1L1。相关性分析表明母鼠肝脏中DHA-S含量与其PT、APTT值相关系数高于0.795,具有较好的相关性。雌雄大鼠肝脏中VKORC1的表达量与其PT、APTT间相关系数在0.74～0.89之间。结论:200 mg/kg的DHA-S可引起大鼠凝血指标PT和APTT的延长,存在出血倾向。母鼠肝脏和肺脏中DHA-S含量明显高于公鼠,母鼠肝脏中DHA-S含量与其PT、APTT间具有较好的相关性。DHA-S通过抑制VKORC1和VKORC1L1而致大鼠凝血障碍,VKORC1机制可能起更重要作用。