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H5亚型高致病性禽流感(HPAI)是由H5亚型禽流感病毒(AIV)中的一些毒株引起的禽类高度致死性传染病,并威胁着人类的健康,被国际兽医局(OIE)列为A类疾病,在我国被列为一类动物传染病。国际上对HPAI的控制主要采取扑杀及其他生物安全措施,疫苗免疫接种也是控制疫情的关键措施之一。目前应用的油乳剂全病毒灭活疫苗虽然具有效果确实、保护率高、免疫期长和研制周期短等优点,但也存在许多缺陷,主要是灭活苗的使用影响疫情监测及不能产生粘膜免疫应答。DNA免疫能诱导机体产生特异性的细胞免疫、体液免疫和粘膜免疫,且不受母源抗体的干扰,被称为第三代疫苗。表达HA基因的AIV DNA疫苗只产生针对HA蛋白的抗体,不影响疫情监测,且受母源抗体的干扰小。但现有的H5亚型AIV DNA疫苗的免疫保护水平与油乳剂全病毒灭活疫苗相比仍有差距,需进一步优化,以提高免疫效力。许多研究表明,选择合适的DNA疫苗佐剂(如CpGDNA、细胞因子、趋化因子、HSP和C3d等)可在被接种动物体内很好地发挥免疫调节作用,不仅能增强免疫反应的强度,还可改变诱发的免疫反应类型,提高免疫力。本研究将构建鸡IL-2、IL-18或IFN-γ与H5亚型AIV HA基因共表达的DNA疫苗以及在真核表达质粒中嵌合CpG基序的DNA疫苗,然后以减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207运送这些真核表达质粒,以空白组、空载体组和禽流感油乳剂灭活疫苗免疫组作为对照,来评价鸡IL-2、IL-18、IFN-γ cDNA和CpG DNA在减毒沙门氏菌运送H5亚型禽流感核酸疫苗中的佐剂作用。 一些H5亚型禽流感DNA疫苗免疫后能提供部分或完全的免疫保护率,但未检测到血清抗体水平的升高。细胞免疫在这种疫苗免疫保护中究竟起多大作用?为了研究CD4~+或CD8~+T细胞在其中的作用以及CD3~+T细胞的绝对数量(或百分比)变化等,研制抗鸡CD3、CD4和CD8分子的单克隆抗体很有必要。