【摘 要】
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实验目的:本实验将在去势大鼠模型和良性前列腺增生大鼠模型中获取大鼠前列腺组织,检测大鼠前列腺组织中细胞凋亡与自噬相关蛋白如Caspase3、PRAP-1、LC3、Beclin-1等随时间的表达变化,系统性研究细胞凋亡与自噬的变化趋势,验证雄激素对细胞凋亡和自噬的调控机制。研究方法:选取8周龄250±10g雄性SD大鼠共63只,切除大鼠双侧睾丸建立去势模型,去势术后第1天、2天、4天、8天、16天、
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实验目的:本实验将在去势大鼠模型和良性前列腺增生大鼠模型中获取大鼠前列腺组织,检测大鼠前列腺组织中细胞凋亡与自噬相关蛋白如Caspase3、PRAP-1、LC3、Beclin-1等随时间的表达变化,系统性研究细胞凋亡与自噬的变化趋势,验证雄激素对细胞凋亡和自噬的调控机制。研究方法:选取8周龄250±10g雄性SD大鼠共63只,切除大鼠双侧睾丸建立去势模型,去势术后第1天、2天、4天、8天、16天、28天随机选取3只大鼠获取前列腺组织,对照组大鼠直接获取前列腺组织,实验重复3次;选取8周龄250±10g雄性SD大鼠共40只,随机分为去势+溶剂组和去势+睾酮组,去势+溶剂组为游离大鼠双侧睾丸但不切除,皮下注射1ml溶剂(橄榄油加10%的乙醇溶液);去势+睾酮组为切除大鼠双侧睾丸,术后予以丙酸睾酮0.5mg/Day(溶于1ml的乙醇溶剂)后腿皮下注射。于不同的时间点(1、4、8、16、28天),每次各组随机选取4只大鼠,获取大鼠前列腺组织。两组模型中大鼠前列腺组织称重、测体积后分为两份,一份用10%甲醛溶液固定24小时后进行石蜡包埋,一份液氮冻存后存储在-80℃冰箱中保存。石蜡包埋的前列腺组织切片后行HE染色,观察对照组、去势组、去势+溶剂组和去势+睾酮组在不同时间点前列腺组织形态学方面的变化,TUNEL法检测前列腺组织凋亡水平随时间的变化关系,Western blot检测凋亡相关蛋白PRAP-1、Caspase-3以及自噬相关蛋白Beclin-1、LC-3的表达变化。实验结果:大鼠去势模型中,与对照组相比,去势第2、4、16、28天前列腺重量和前列腺指数显著下降(P<0.05),去势+睾酮组前列腺重量和指数在第4、8、16、28天相比去势+溶剂组显著增加(P<0.01)。Western Blot结果显示:正常大鼠前列腺组织LC3-Ⅱ即有一定量的表达,去势第2～8天表达量显著增加(P<0.05),第16～28天表达量显著降低(P<0.05)。从第16天开始Caspase-3表达量显著减少(P<0.05),PRAP-1裂解片段在第8～16天开始显著增加,第28天时表达量显著减少(P<0.05)。与去势+溶剂组相比,去势+睾酮组LC3-Ⅱ表达量显著增加(P<0.01),Beclin-1裂解片段在8～28天表达量显著增加。TUNEL法检测大鼠前列腺组织凋亡,结果显示相比对照组和去势第1天,去势第2～28天前列腺组织凋亡水平显著增加(P<0.01);与去势+溶剂组相比,去势+睾酮组在第4～28天凋亡水平显著降低(P<0.01)。实验结论:大鼠去势后前列腺组织细胞早期自噬活动增强,发挥细胞代偿作用,在自噬增强的阶段,凋亡水平逐渐升高,后期自噬减弱后凋亡无明显升高;Caspase-3活化,表达量降低,凋亡进入不可逆阶段。大鼠去势过程中,前列腺组织细胞不同阶段死亡方式可能不同,早期可能通过自噬途径死亡,后期主要通过凋亡途径死亡;雄激素诱导前列腺增生过程中,自噬水平升高的同时伴随着Beclin-1蛋白裂解增多,但凋亡作用减弱,可能与雄激素能抑制Beclin-1-C端,增强自噬作用有关;剥夺雄激素和诱导前列腺增生过程中,“自噬-凋亡”并非相互独立,而是相互关联。
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