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嗜肺军团菌是军团病的致病菌,在环境中,军团菌通常生活在各种水体中。人通过吸入含军团菌的气溶胶感染军团病,其致病性在于它可在肺巨噬细胞中进行胞内繁殖,并导致巨噬细胞裂解,从而引发炎症。自从被发现以来,该菌以其独特的胞内寄生行为以及毒力分泌系统引起了各国细菌遗传学家的兴趣,成为细菌胞内繁殖研究的模式生物之一。
本论文从氨基酸序列同源性、保守功能域以及三维结构模型分析,得出军团菌Dps(Dps—lp)具有典型的Dps家族蛋白特征。Dps—lp与大部份的Dps同源蛋白的氨基酸序列有比较显著的同源性,铁氧中心的关键氨基酸位点高度保守,与DNA结合的关键位点也很保守;通过在线结构分析网站预测Dps—lp的结构,发现其结构特征与其它菌中Dps同源蛋白的结构非常相似。对dps—lp启动子区域的初步研究显示:dps—lp的转录起始于其ORF上游的第25个碱基。
本论文先从转录水平分析了军团菌dps—lp的表达及在受到外界胁迫后的表达变化。dps—lp在军团菌生长的整个周期都会表达,但在稳定期的表达量明显高于指数期。培养液中加入铁离子螯合剂后,dps—lp的表达量迅速上升,这种表达量的瞬间变化没有生长周期的区别,显示dps—lp的表达不仅受到生长周期的调控,同时还受到环境中铁离子浓度的调控。过氧化氢胁迫、酸胁迫、热激处理后,都将导致dps—lp表达量的迅速上升。
本论文还分析了Dps—lp的缺失对军团菌生长及抵御外界胁迫能力的影响。Dps—lp的缺失对于军团菌在正常培养基中的生长无显著影响,但会导致突变株在缺铁培养基中的生长发生延迟。Dps—lp的缺失对军团菌抵御外界胁迫的能力有较大的影响,突变株对于过氧化氢胁迫、酸胁迫、热激的抵抗能力明显不如野生型,同时对盐的敏感性下降。初步的实验结果显示,Dps—lp的缺失对军团菌的毒力造成了一定的影响。
本论文对影响dps—lp表达的转录因子进行了筛选。运用转座子插入突变的方法,成功的筛选到vacB等一系列能够调控dps—lp表达的转录因子;用生物信息学方法,在dps—lp启动子区域找到了数个与quorum sensing现象相关的转录因子结合位点,并且证明在quorum sensing诱导因子的诱导下,dps—lp的表达水平显著提高,显示dps—lp与quorum sensing现象有密切的关系。
此外,本论文还对军团菌的另一个胁迫相关基因oxyR1-lp进行了研究,确定了它的转录起始位点,对它在整个生长周期的表达情况进行了分析,发现oxyR1-lp在生长周期的指数早期表达量最高。