黄花苜蓿MfDREB1转录因子在提高转基因烟草抗逆性中的作用研究

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本研究以T1代超表达黄花苜蓿逆境胁迫相关转录因子MfDREB1的心叶烟草和转化不含目的基因的空载体的转基因心叶烟草为研究材料,自交筛选获得了转基因烟草T3代纯合株系72个。在实验室条件下,分别用0℃、300 mM NaCl和20%PEG6000模拟非生物环境胁迫处理野生型和转基因心叶烟草纯合植株A3-6和B3-8,烟草植株抗逆表型显示MfDREB1明显提高了转基因烟草的抗逆性。运用实时荧光定量PCR技术,分析了3种逆境胁迫条件下的转基因烟草植株外源MfDREB1基因以及受其调控的下游抗逆基因NtERD10A和NtP5CS的表达,结果表明低温、高盐和干旱非生物胁迫处理后,转基因心叶烟草纯合植株A3-6中MfDREB1、NtERD10A和NtP5CS基因的相对表达量均呈现先升高后降低再升高的趋势;而胁迫处理前后,野生型心叶烟草和转基因心叶烟草纯合植株B3-8中MfDREB1、NtERD10A和NtP5CS基因的相对表达量无明显变化。以超表达载体pPZP221 (35S-MfDREB1-NOS)中MfDREB1基因的3’端序列(238 bp)和NOS片段(253 bp)的重组片段(491 bp)做为杂交探针,运用地高辛标记法,对转基因烟草纯合植株进行Southern Blot检测,结果表明转基因心叶烟草纯合植株A3-6的基因组中有3拷贝外源重组片段插入,而野生型烟草和转基因心叶烟草纯合植株B3-8的基因组中没有检测到外源重组片段的插入。
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