论文部分内容阅读
目的:免疫组化法检测基质金属蛋白酶抑制剂RECK及膜型基质金属蛋白酶MMP-14在神经母细胞瘤中的表达情况,探讨其在神经母细胞瘤的发生、发展、浸润和转移中的作用。方法:选择临床及病理资料齐全的存档神经母细胞瘤蜡块标本36例,另取节细胞神经瘤蜡块标本10例作对照.采用第二代通用型二步法监测系统（PV-6000）免疫组化方法检测RECK及MMP-14蛋白的表达。结果:RECK在神经母细胞瘤组织中低表达（16.7%）,并随肿瘤浸润深度的加深、远隔转移的发生、临床分期的提高而降低（P＜0.05）。MMP-14在神经母细胞瘤组织中高表达（58.3%）,并随肿瘤浸润深度的加深、临床分期的提高而增高（P＜0.05）。神经母细胞瘤组织中RECK与MMP-14的表达呈负相关（r=-0.418,P＜0.05）。结论:神经母细胞瘤组织中RECK低表达,MMP-14高表达。RECK及MMP-14可能成为评估神经母细胞瘤发生浸润转移的重要指标。目的:通过选取神经母细胞瘤患者新鲜肿瘤标本建立的人神经母细胞瘤体外细胞系,建立起不同浓度的细胞悬液,将其接种裸鼠,建立神经母细胞瘤荷瘤裸鼠模型,进一步建立裸鼠原位荷瘤及转移瘤细胞系,为下一步的实验做好细胞的准备工作。方法:应用自建的神经母细胞瘤体外细胞系。无菌条件下,将处于对数生长期的人神经母细胞瘤细胞用酶消化法制备成单细胞悬液,接种于裸鼠单侧胁腹皮下,共接种14只,数日后观察裸鼠致瘤情况,解剖荷瘤鼠,原代培养法建立裸鼠原位荷瘤细胞系及转移瘤细胞系,将细胞放入DMEM培养液,补加10%胎牛血清及青、链霉素,置于37℃、5%CO2、100%湿度的二氧化碳培养箱内培养,为下一步试验做好细胞准备。结果:裸鼠一共致瘤10只,其中单侧皮下致瘤5只,双侧腹膜后致瘤2只,全身转移的裸鼠3只（均有明显的肝脏转移和恶液质体征）,通过原代培养法建立起裸鼠原位荷瘤细胞系及转移瘤细胞系,细胞染色较深,形状不规则,细胞呈小梭形,部分呈泪滴状,少数呈三角形,菊团状生长,分化低,细胞核大、深染,电镜下可见含有纵行排列的微小管的外围齿状突起,有致密核心的有包膜儿茶酚胺小圆颗粒。结论:我们成功建立神经母细胞瘤荷瘤裸鼠模型,并成功建立裸鼠原位荷瘤及转移瘤细胞系,证实我们自己建立的神经母细胞瘤细胞系具有局部致瘤及转移特性,说明细胞系中存在具有转移潜性的细胞亚群,为进一步探讨神经母细胞瘤转移机制奠定基础,并为下一步通过RT-PCR法检测神经母细胞瘤转移相关基因表达差异创造了良好的开端。目的:检测自建的裸鼠原位荷瘤细胞系及转移瘤细胞系中RECK及MMP-14mRNA的表达,比较裸鼠两种细胞中二者的表达差异及临床意义。方法:应用RT-PCR法检测自建裸鼠原位荷瘤细胞及转移瘤细胞中RECK及MMP-14mRNA的表达。结果:裸鼠原位荷瘤细胞中RECK mRNA的表达较裸鼠转移瘤细胞中的表达明显增高（t=3.012,p＜0.05）,MMP-14mRNA在裸鼠原位荷瘤细胞中的表达则较裸鼠转移瘤细胞中的表达明显降低（t=2.802,p＜0.05）。结论:本研究提示RECK及MMP-14基因与神经母细胞瘤的浸润、转移可能有关,RECK及MMP-14可能在小儿神经母细胞瘤的发生、发展中起重要作用。