锌指抗病毒蛋白抑制XMRV复制及受Trim25调控的机制研究

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锌指抗病毒蛋白(Zincfingerantiviralprotein,ZAP)是通过高通量功能基因组筛选得到的抗病毒蛋白,能够抑制鼠白血病病毒、部分甲病毒属病毒和丝状病毒的复制。ZAP特异性结合靶病毒RNA并招募细胞内的RNA降解机器实现mRNA的降解。本文分析了ZAP对于异嗜性小鼠白血病病毒相关病毒(XMRV)的抑制作用,以及相关蛋白Trim25对ZAP抗病毒功能的影响。   首先,本文构建了用荧光素酶基因(luc)替换了Gag-Pol以及部分Env序列的报告载体XMRV-luc作为研究XMRV的研究工具,然后过表达ZAP,检测相对荧光强度。结果发现,ZAP对XMRV-luc存在依赖于ZAP表达量的抑制作用。另一方面,用RNA干扰来敲低内源性ZAP,则发现XMRV-luc的表达有明显升高。进一步的研究发现,ZAP能特异性降解XMRV-luc在细胞质中的mRNA,而XMRV-luc上的3UTR则是ZAP的特异性识别序列。   另外,我们还研究了Trim25蛋白与ZAP之间的相关作用关系。RNA干扰的实验表明,Trim25被敲低后,ZAP的抗病毒功能受到了严重影响。在缺乏Trim25的情况下,ZAP降解病毒RNA和抑制病毒mRNA翻译的功能都受到影响。然而,Trim25并不影响ZAP招募RNA降解相关蛋白。通过构建Trim25的功能缺失体,我们发现,Trim25的ISGylationE3连接酶的活性在这一过程中起到关键作用。
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