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山葵(Eutrema Wasabia Maxim)为十字花科辣根属多年生草本植物。它是我国近几年从台湾、日本等地引进的一种香辛料作物,具有香、辛、甘及粘等独特的风味珍稀蔬菜。在台湾、日本、泰国、韩国等地受到当地居民的青睐。我国四川的优越气候资源和丰富的劳动力资源,适合大面积种植和发展山葵,但经调查发现目前四川山葵种植业受到山葵墨入病等一些病害的严重威胁。这种病害不仅影响山葵的产量和质量,造成很大的经济损失,而且影响山葵的种植和可持续发展。为此我们对四川都江堰、乐山、什邡、邛崃、崇州等市(县)山葵种植基地的山葵墨入病危害情况进行了田间调查,并采集带病植株进行室内分离鉴定。结果表明山葵墨入病是危害山葵的最为严重的病害,病株率可达90.00%~100%,病叶率达28.13%~78.99%。发病后,在山葵叶片上产生黑色病斑,茎干内部变黑腐败,严重时整个植株腐烂倒伏。 我们从山葵墨入病病株中分离出了山葵茎点霉菌Phoma wasabiae Yokogi。对其生物学特性研究结果表明,PDA培养基为该菌生长的最佳培养基;不同的温度、pH值、光照等条件对该菌的菌丝生长和产孢有明显的影响。适宜该菌的生长温度范围为19~25℃,最适温度为22℃;适宜该菌生长的pH在5.0~7.5之间,最适在弱酸性、中性和弱碱性条件下生长;该菌在黑暗条件下比在一直光照和光暗交替处理下都生长快,而且产孢能力相对较强。该病原菌致死温度为54℃(10min),孢子的致死温度为49℃(10min)。该病菌有较强的寄主专化性。 在对四川境内山葵墨入病害进行广泛调查和病原采样收集的基础上,我们利用RAPD分子标记技术分析了四川山葵种植区域内山葵墨入病菌的遗传多样性,揭示了该菌的遗传分化等特性,为进一步研究山葵墨入病菌鉴定和山葵墨入病抗病育种、病害预测及防治提供了依据。我们用改进的氯化苄法获得了供试菌株DNA。从40个10-碱基的寡聚核苷酸随机引物中选用了6个作为引物,对25个P. wasabiae Yokogi和3个近似菌Macrophoma sp.菌株的DNA进行PCR扩增,应用凝胶图谱分析软件分析了25个P. wasabiae Yokogi和3个近似菌Macrophoma sp.菌株的DNA指纹特征,并对不同的随机引物的扩增结果进行了聚类分析。RAPD图谱分析结果显示,我们选出的6条引物共扩增出575条带,多态性条带为103条,占17.91%,扩增片段多在200~1100bp之间。不同引物得到的扩增条带数在85~110之间,扩增条带数最多的引物是Q18;多态性条带在13~27条之间,平均每个引物扩增出17.16条带,多态性条带最多的是W6。四川农业大学硕士学位论文中文摘要通过聚类分析还发现p~biaeyokogi的菌株间存在遗传多样性,尸wasabiaeyokogi的菌株聚为两类,且各自又分为2个亚类,说明p wasabiaeyokogi在遗传上出现了分化;并且该分化同地域分布、采集时间、采集部位有一定关系,在一定程度上说明了病原菌在适应生态环境过程中产生了分化。同时,山葵墨入病菌和近似菌在很小的遗传距离内就分别聚类,说明RAPD标记技术在菌种的划分和鉴定上具有很高的灵敏性和准确性。利用引物扩增的指纹图谱能准确有效地反映了P wasabiae菌株间以及和近似菌大茎点霉Macroph口m口菌株之间的遗传距离和亲缘关系,总的来说,四川山葵墨入病菌的生物多样性和遗传多样性相对简单。同时6条引物扩增得到了179bP、272bP、277 bP、308 bP、415 bP、462bP、500bP、521 bp、540bP、582bP、593bP、677bP、764 bP、875 bp、93 lbP、1031 bp属于P wasabia。的稳定的特征性片段,为进一步确定用于鉴定该菌的有效分子标记奠定了基础。