甜瓜果斑病抗性鉴定及抗果斑病和霜霉病QTLs定位

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甜瓜(Cucumis melo L)在新疆栽培历史悠久,是当地重要的经济作物之一。新疆甜瓜品质独特,享誉国内外。然而,目前细菌性果斑病和霜霉病等病害严重地威胁着甜瓜生产,导致甜瓜品质下降,产量降低,引起较为严重的经济损失。甜瓜种质资源丰富多样,其中一些品种对果斑病和霜霉病具有抗性但农艺性状不佳,对这些抗病种质的抗性基因进行发掘,利用抗病基因对现有甜瓜品种进行改良是甜瓜产业发展的当务之急。基于此,本文开展了甜瓜细菌性果斑病和霜霉病抗性基因发掘的相关研究,主要内容和研究结果如下:(1)在新疆主栽甜瓜产区果斑病调研和采样的基础之上,分离鉴定果斑病致病菌。2014-2016年,从新疆昌吉和石河子采集甜瓜叶片及果实病样,对样品进行分离纯化、致病性鉴定以及16S r DNA序列比对分析。一共分离、纯化获得了65个细菌菌株,经致病性鉴定,27个菌株有致病性,且16S r DNA序列比对与Acidovorax.citrulli同源性达到99%以上。不同年份同一采集地分离的致病菌,16S r DNA序列一致,都有致病性。不同采集地分离的致病菌在系统发育进化树中聚在一支,与对照菌株xjgb-wy6及已报道菌株Acidovorax citrulli XJ-4同源。(2)通过改良传统温室喷雾接种方法,建立稳定的甜瓜苗期果斑病抗性鉴定平台。模拟大田人工接种方法,不仅能够保证甜瓜材料发病的一致性、重复性,而且比较不同甜瓜材料苗期在模拟大田人工接种、田间自然发病和田间人工接种的病情评价,该方法能反映植株田间抗性表现。(3)对不同甜瓜品种进行果斑病抗病性鉴定,筛选抗果斑病的甜瓜品种。2014-2017年,采用室内离体叶片、室内苗期喷雾接种、田间自然发病调查、模拟大田苗期喷雾接种及小区块实验田苗期喷雾接种等5种发病环境,对132份甜瓜材料进行了果斑病抗性鉴定。综合抗性鉴定结果,新疆地方品种和商品种中没有抗性品种。筛选出的抗性品种有16个,分别为PMR5、PMR6、MR-1、Vedrantis Nantais、Nantais Oblong;引进品种Ano2和GM;薄皮甜瓜Y8、Y9和Y13;野生品种Y17和Y18;哈密瓜甜瓜自交系ANK-9、X25M、PHLL和XF2-2。其中,Y8、Y9、MR-1和Ano2在5种发病环境下表现稳定抗性,Vedrantis和Nantais Oblong在室内人工接种条件下表现较为稳定的抗性。(4)研究多种环境下表现抗病的甜瓜品种抗性遗传规律。抗性品种Y8、Y9、MR-1和Nantais Oblong这4个抗性亲本与不同感病亲本构建的14个遗传群体不符合单基因遗传分离比。Y8抗性由多基因控制,通过SSR分子标记结合BSA方法,在LG4和LG5这两个连锁群检测到果斑抗性相关位点。Y9抗性遗传规律与Y8大致相同,呈现不完全显性、多基因控制。MR-1中抗性呈现多基因控制,通过SSR标记结合BSA方法,在LG1、LG2、LG5和LG7这4个连锁群检测到果斑抗性相关位点。Nantais Oblong与不同感病亲本组合都呈现偏隐性、多基因控制的遗传规律。(5)采用传统遗传图谱定位结合双亲测序的方法,首次开展高抗品种Ano2果斑病抗性QTL的研究。利用抗病品种Ano2(P1)和感病品种K413(P2)构建的RIL8群体建立遗传连锁图,对抗性QTL初步定位。在BC1P1和F2大群体中对抗性QTL精细定位,在LG10连锁群上定位了一个果斑抗性QTL,命名为bfb QTL10.1,位于标记chr10-0356和chr10-0365之间,物理距离为94.5 kb,该区域包含了16个基因,基因序号为MELO3C011954T1至MELO3C011970T1。(6)以霜霉病抗性品种MR-1为材料,探究其霜霉病抗性遗传规律,对抗性QTLs进行定位,预测抗病候选基因。利用传统遗传图谱定位结合QTL-seq的方法,开展MR-1霜霉病抗性QTLs的研究。LG3、LG4、LG5和LG9连锁群上检测到抗性相关QTL位点。综合定位结果,在LG4连锁群上发现一个抗病主效QTL,DM-QTL4.1,在不同年份、不同群体和不同定位方法都能重复检测出。将DM-QTL4.1定位在标记chr4-2791和GCM336之间,物理距离为11kb,该区域包含了三个基因,分别是MELO3C009804T1、MELO3C009805T1和MELO3C009806T1。其中,MELO3C009806T1编码抗病蛋白RGA4,富含亮氨酸重复序列(LRR)和蛋白激酶结构域(NB),参与抗病信号转导机制。MELO3C009804T1编码乙烯应答转录因子(ERF)AP2-like factor,参与植物响应逆境胁迫,这两个基因可能与霜霉病抗性相关。获得4个同霜霉病抗性位点紧密连锁的分子标记,分别是抗性位点DM-QTL4.1连锁的侧翼标记chr4-2791和GCM336,与抗性位点的遗传距离分为0.5c M和0.6c M,抗性位点DM-QTL5.1连锁的侧翼标记chr5-1353和chr5-1488,与抗性位点的遗传距离分为1.9 c M和0.1 c M。这些标记可用于霜霉病分子标记辅助育种。
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