多金属氧酸盐在显色免疫检测方面的研究

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癌症生物标记物的检测在癌症的早期诊断和临床研究中起着重要的作用。多元的显色免疫测定方法有很多优点:分析过程简单、耗时短、检测效率高、节省样品用量和降低成本等。用辣根过氧化物酶(HRP)作氧化酶的显色免疫测定过程中,需要HRP标记的二抗,才能完成3,3′5,5′-四甲基联苯胺(TMB)的氧化。而上述检测过程中存在一些缺点:HRP不稳定易变性而失去其过氧化物酶活性;过氧化氢经长期贮存会发生分解,从而失去在HRP的作用下氧化TMB的能力。因此,我们设计了有可能被广泛应用于临床的更稳定、简便的免疫方法。叶酸Folate(FA)的结构与氨基酸的结构很相似。氨基酸和二肽阳离子已经被用于建造特定的杂多金属氧酸盐(POMs)的超分子结构。TMB是一种有机染料,由于其氧化物呈蓝色,故在许多生物检测中TMB作为HRP的底物。TMB作为底物,已经证实了Fe3O4纳米粒子和单壁碳纳米管都具有类似过氧化物酶的性质。因此,我们以K5PV2Mo10O40(PMV)和γ-[(FeOH22SiW10O36](Fe2SiW10)为无机部分,FA为有机部分进行自组装合成叶酸功能化的杂多纳米粒子FA-K5PV2Mo10O40(FA-PMV)和FA-γ-[(FeOH22SiW10O36](FA-Fe2SiW10)。我们探究了FA-PMV和FA-Fe2SiW10催化氧化底物TMB的活性。结果表明在中性和酸性溶液中,有机-无机杂多纳米粒子FA-PMV和FA-Fe2SiW10具有类似氧化酶的性质,能在O2或H2O2的存在下催化氧化TMB。用叶酸修饰PMV和Fe2SiW10的目的是增强FA-PMV和FA-Fe2SiW10对肿瘤细胞的生物适应性和靶向性。基于FA-PMV和FA-Fe2SiW10的双功能性(即一端与过表达叶酸的癌细胞结合,一端可催化氧化显色底物TMB),我们设计了用FA-PMV和FA-Fe2SiW10进行检测肿瘤细胞的检测体系。葡萄糖浓度的测定在我们的生活中越来越重要。为了探究POMs的过氧化酶活性,我们选择三种不同的杂多酸POMs:H3PW12O40(PW12),H4SiW12O40(SiW12)和H3PMo12O40(PMo12),并分别探究了他们在检测H2O2时的催化活性。实验结果显示PW12催化效果最好。因此,我们选择PW12作为我们检测H2O2和葡萄糖体系的催化剂。1.制备了叶酸功能化的多金属氧酸盐:FA-PMV和FA-Fe2SiW10纳米粒子,并对其用IR、UV、XRD、TEM、EDAX等方法进行表征。2.探究FA-PMV和FA-Fe2SiW10纳米粒子的催化活性。3.用FA-PMV和FA-Fe2SiW10进行检测肿瘤细胞。4.制备杂多酸:PW12,SiW12和PMo12。5.探究PW12,SiW12和PMo12的催化活性。6.用PW12进行检测H2O2和葡萄糖的浓度。
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