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温度不但与动物的生长息息相关,对于疾病的发生也密切相关。温度作为病毒感染的诱因,会影响一些病毒的复制过程,对于鲤春病毒血症病毒(Spring Viraemia of Carp Virus,SVCV),鱼体发病温度为16℃-17℃,高温或者低温都不易于发病。而温度对SVCV感染的影响研究较少。热休克蛋白,作为重要的温度效应蛋白,参与众多病毒的侵染过程,对SVCV复制的影响研究更少。鉴于此,本试验探讨不同温度对SVCV感染鲤鱼上皮瘤细胞(EPC)活性的影响以及蛋白组学变化,通过筛选验证,初步探究了Hsp70其复制的影响,结果有利于深入了解SVCV的致病机制,为下一步SVCV的治疗以及预防提供新的策略。1.温度对SVCV感染EPC细胞活性和凋亡的影响MTT法检测细胞活性变化,细胞处理温度为16℃、21℃、26℃、31℃和36℃,时间为12h、24h和36h;相对于26℃,随着温度的变化,时间的增加,细胞活性逐渐降低;感染病毒后,高温状态下细胞活性随时间的增加,降低更显著;病毒滴度结果显示在31℃滴度最高。26℃和31℃,感染时间为24h,测定细胞凋亡,SVCV感染EPC细胞后,能够显著增加死细胞和晚期凋亡比例,温度升高时作用更显著;31℃时,SVCV-G基因表达量显著增加。2.温度对SVCV感染EPC细胞蛋白组学分析26℃和31℃,感染时间为24h,测定蛋白组学变化。结果表明:26℃SVCV对比26℃组,发现差异蛋白35个,其中19个上调表达,16个下降表达;31℃SVCV对比31℃组,发现差异蛋白786个,其中383个上调表达,403个下降表达;31℃对比26℃组,发现差异蛋白624个,其中314个上调表达,310个下调表达;31℃SVCV对比26℃SVCV组,发现差异表达蛋白220个,其中93上调表达,127个下调表达;差异蛋白主要功能注释集中在regulation of insulin secretion involved in cellular response,cell redox homeostasis,spindle assembly,DNA replication initiation等功能;差异蛋白富集通路主要富集在Protein processing in endoplasmic reticulum,Glutamatergic synapse,Melanogenesis等通路;对Protein processing in endoplasmic reticulum部分差异蛋白结果验证与蛋白组学一致。3.Hsp70敲降对SVCV复制的影响通过对蛋白组学结果进行筛选,对蛋白在内质网加工通路中Hsp70基因进行敲降;结果显示,Hsp70敲降显著调节TLR3、IRF3和IFN-β表达量,对TLR9、IRF7和IFN-α调节不显著;Hsp70敲降使得SVCV-G表达量显著升高,可能与Hsp70调节了TLR3和IRF3表达量,诱导了IFN-β降低表达有关。