【摘 要】
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目的:探讨miR-137通过靶向TRIM24调控前列腺癌细胞对比卡鲁胺耐药及其表观遗传学机制。方法:在LNCaP前列腺癌细胞系中建立比卡鲁胺耐药细胞模型,经MTT实验对模型进行验证。分别对野生型LNCaP前列腺癌细胞系（对比卡鲁胺敏感,简称parental细胞）和比卡鲁胺耐药LNCaP前列腺癌细胞系（简称resistant细胞）进行miRNAs芯片检测分析,比较miRNAs在parental细胞和
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目的:探讨miR-137通过靶向TRIM24调控前列腺癌细胞对比卡鲁胺耐药及其表观遗传学机制。方法:在LNCaP前列腺癌细胞系中建立比卡鲁胺耐药细胞模型,经MTT实验对模型进行验证。分别对野生型LNCaP前列腺癌细胞系（对比卡鲁胺敏感,简称parental细胞）和比卡鲁胺耐药LNCaP前列腺癌细胞系（简称resistant细胞）进行miRNAs芯片检测分析,比较miRNAs在parental细胞和resistant细胞中的差异性表达。筛选出下调倍数最多的miR-137作为研究的miRNA,检测miR-137对前列腺癌比卡鲁胺敏感性的影响。通过miRNA靶标预测软件和基因功能分析,预测miR-137的潜在靶基因。检测miR-137潜在靶基因TRIM24在parental和resistant前列腺癌细胞中表达水平,再检测miR-137对resistant前列腺癌细胞中TRIM24表达的影响。通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-137与TRIM24基因的直接相互靶向作用。检测沉默TRIM24基因后对前列腺癌细胞中TRIM24表达及对比卡鲁胺敏感性的影响。检测过表达TRIM24阻断miR-137对前列腺癌细胞比卡鲁胺的增敏作用。并检测分析多种前列腺癌细胞系中miR-137与TRIM24基因mRNA水平的相关性和前列腺癌组织中miR-137、TRIM24的mRNA表达水平及其相关性。检测沉默EZH2对resistant前列腺癌细胞中miR-137和TRIM24表达的影响。对miR-137进行生物信息学分析,寻找甲基化位点,并进行染色质免疫共沉淀（Ch Ip）实验检测DNMT1、DNMT3B和MeCP2与miR-137基因启动子区的结合作用。检测沉默MeCP2对resistant前列腺癌细胞中miR-137和TRIM24表达的影响。采用甲基化抑制剂5-Aza-Cd R处理resistant前列腺癌细胞,检测对miR-137、TRIM24表达的影响和DNMT3B、MeCP2与miR-137基因结合的影响。结果:成功建立了比卡鲁胺耐药细胞模型。miRNAs芯片检测分析结果显示,parental细胞和resistant前列腺癌细胞中存在多种miRNAs的差异性表达,其中miR-137的下调倍数最多。过表达miR-137能够提高前列腺癌对比卡鲁胺的敏感性。通过miRNA靶标预测软件和基因功能分析,发现TRIM24基因可能是miR-137的潜在靶标基因。与parental细胞相比,resistant前列腺癌细胞中TRIM24的mRNA和蛋白水平显著上调,而miR-137能够下调resistant前列腺癌细胞中TRIM24的mRNA和蛋白水平。双荧光素酶报告基因实验结果显示,在前列腺癌细胞中,miR-137直接靶向结合TRIM24基因mRNA的3’-UTR区,并下调TRIM24的表达。沉默TRIM24基因能够显著降低列腺癌细胞中TRIM24的mRNA和蛋白水平,并提高前列腺癌细胞对比卡鲁胺敏感性。过表达TRIM24能够阻断miR-137对前列腺癌细胞比卡鲁胺的增敏作用。在LNCaP、PC3、ARCa P等细胞系中miR-137与TRIM24的mRNA水平呈负相关。与癌旁组织中相比,前列腺癌组织中miR-137的mRNA表达水平显著降低,TRIM24的mRNA水平显著升高,且二者呈负相关。沉默EZH2对resistant前列腺癌细胞中miR-137和TRIM24的mRNA表达无影响。对miR-137进行生物信息学分析,在基因转录起始位点附近（-276-+187）发现3个高甲基化位点。Ch Ip实验结果显示,DNMT1不与3个甲基化位点结合,而DNMT3B和MeCP2均与3个甲基化位点结合。沉默MeCP2后,resistant前列腺癌细胞中miR-137的mRNA和蛋白水平显著上调,TRIM24的mRNA和蛋白表达水平显著下调。采用甲基化抑制剂5-Aza-Cd R处理resistant前列腺癌细胞后,miR-137的mRNA和蛋白水平显著上调,TRIM24的mRNA和蛋白表达水平显著下调,且DNMT3B、MeCP2与miR-137基因结合显著减少。结论:miR-137通过直接靶向TRIM24调控了前列腺癌比卡鲁胺耐药,且DNMT3B和MeCP2参与前列腺癌细胞中miR-137的表观遗传学调控,沉默MeCP2能够上调miR-137并同时下调TRIM24的表达。
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