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猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）是以怀孕母猪繁殖障碍和猪呼吸系统疾病为特征的传染性疾病。PRRSV具有较强的变异性，亚洲许多国家和地区均出现了高致病性的美洲型PRRSV，而且东欧地区也出出现了致病力和传染性力更强的欧洲型毒株。随着PRRSV的传播打破原有的地域限制，中国不仅存在高致病性美洲型PRRSV，同时也出现了欧洲型PRRSV，导致该病的防控更加复杂。为了更好的防控欧洲型PRRSV，本研究以欧洲型代表株LV株ORF3、ORF5基因为研究对象，构建了ORF3和ORF5基因的原核表达质粒pET-28a-ORF3、pGEX-4T-ORF5和3个重组真核表达质粒pVAX-ORF3、pVAX-ORF5和pVAX-ORF3-ORF5，并对其表达产物进行小鼠及猪的免疫评价。将LV株ORF3、ORF5基因分别构建了原核表达质粒pET-28a-ORF3、pGEX-4T-ORF5，经IPTG诱导表达，显示目的蛋白能够以包涵体形式正确表达。免疫印迹实验表明，目的蛋白均具有良好的反应原性。ORF3和ORF5亚单位疫苗免疫仔猪实验表明，ORF3和ORF5蛋白均能刺激仔猪产生特异性抗体。细胞因子水平方面能诱导机体产生Th2类体液免疫反应。病毒载量检测结果表明，大肠杆菌表达的ORF3和ORF5亚单位疫苗对仔猪有一定水平的保护力。将LV株PRRSV ORF3、ORF5基因插入到pVAX1真核表达载体，构建了3个重组真核表达质粒pVAX-ORF3、pVAX-ORF5和pVAX-ORF3-ORF5，转染BHK细胞进行表达。经RT-PCR、间接免疫荧光鉴定，目的基因在BHK细胞中分别得到正确表达。免疫小鼠实验表明，免疫后小鼠体内开始出现PRRSV特异性抗体，二次免疫后抗体水平继续升高，在35d达到高峰，显著高于免疫pVAX和PBS对照组。细胞免疫结果发现，核酸疫苗组刺激小鼠T淋巴细胞亚群的增殖和分化显著高于pVAX和PBS对照组。细胞因子结果表明，在14-35d细胞因子IFN-γ、IL-2增长明显，能较好的介导细胞和体液免疫。仔猪免疫实验表明，核酸疫苗能明显刺激仔猪产生PRRSV体液免疫反应，中和抗体效价随时间推移呈不断上升趋势。仔猪细胞免疫效果表明：CD4+、CD8+T淋巴细胞SI（刺激指数）均显著高于pVAX对照组。细胞因子水平显著提高，表明核酸疫苗能够显著刺激仔猪产生Thl类细胞免疫反应，Th2类体液免疫反应。攻毒保护实验发现重组核酸疫苗能对仔猪具很好的保护力，pVAX-ORF3-ORF5免疫效果最佳。本研究利用LV株ORF3和ORF5基因构建了核酸疫苗，同时利用原核表达系统表达了ORF3和ORF5蛋白作为亚单位疫苗，为进一步基因工程疫苗的研究发展奠定了基础。