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目的:观察小鼠结肠癌细胞(C—26)中PPARγ的表达情况,以及CT—26细胞X线照射后凋亡相关因子表达情况和PPARγ配体(Pioglitazone)对照射诱导的凋亡相关因子表达的影响。探讨PPARγ配体对放疗促凋亡作用的影响。
方法:用RT—PCR方法证明PPARγ基因的表达。分别于照射后2h、7h、24h、48h收集细胞,采用MTT、RT—PCR、Western Blot、流式细胞仪检测方法观察10Gy X射线、30μmol/PPARγ配体(吡格列酮)、10Gy X射线+30μmol/LPPARγ配体对CT—26细胞凋亡率的影响以及凋亡相关因子BCL—2、Bax、Caspase—3在mRNA和Pro水平的表达变化。
结果:
①RT—PCR检测结果表明小鼠结肠癌细胞(CT—26)中存在PPARγ mRNA的表达。
②MTT、RT—PCR、Western Blot、流式细胞仪检测结果显示:10Gy X线照射与20μmol/PPARγ配体均可使CT—26细胞的凋亡率增高,而且Bcl—2在mRNA和蛋白水平表达下调、Bax、Caspase—3在mRNA水平表达升高:但10Gy X射线与PPARγ配体联合干预对细胞凋亡率及凋亡相关因子的影响则大于两种单独干预的影响,而且以照射后24h作用最为显著。
结论:
①小鼠结肠癌细胞CT—26经X射线照射后细胞凋亡率增加,并出现凋亡抑制因子Bcl—2表达降低,凋亡因子Bax及Caspase—3表达升高。
②小鼠结肠癌细胞CT—26经PPARγ配体(Pioglitazone)干预后细胞凋亡率增加,并出现凋亡抑制因子Bcl—2表达降低,凋亡因子Bax及Caspase—3表达升高。
③PPARγ配体与放疗结合使用的方法使小鼠结肠癌细胞CT—26的细胞凋亡率明显增加,而且结肠癌细胞中Bcl—2表达下调、Bax及Caspase—3表达增加的作用明显高于PPARγ配体与放疗均单独应用的方法。即PPARγ配体增强了放射治疗的促凋亡作用,对于肿瘤的治疗具有深远的意义。