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猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的一种急性、高度传染的病毒性传染病,对世界养猪业造成巨大的经济损失。2006年,我国出现高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(Highly pathogenic PRRSV,HP-PRRSV),具有很强的感染力和致病性,给我国养猪业带来更大的危害。猪肺泡巨噬细胞(Porcine pulmonary alveolar macrophages,PAMs)是HP-PRRSV的主要靶细胞。I型干扰素(Interferon,IFN)具有抑制PRRSV复制的能力,而IFN发挥抗病毒作用主要是依靠干扰素刺激基因(Interferon stimulated genes,ISGs)编码的宿主限制性因子。寻找抑制HP-PRRSV复制的宿主限制性因子已经成为近年来研究的热点,但IFN刺激产生的限制性因子数量众多,筛选工作量巨大。RNA-Seq技术是新一代测序技术,具有高通量、效率高、灵敏度好的优势。本试验中,利用RNA-Seq技术对IFN处理的PAMs中抗HPPRRSV限制性因子进行高通量筛选。将抗PRRSV的限制性因子ISG15作为指示因子,根据感染PRRSV的PAMs中ISG15的表达变化,选择接毒后12小时作为收样时间。本实验设置了4个不同处理组,分别为IFN、IFN+PRRSV、PRRSV和C(空白对照组)组。用猪IFN-α处理PAMs诱导细胞产生抗病毒状态,再感染HP-PRRSV,进而用RNA-Seq技术检测IFN预处理的PAMs对HP-PRRSV的应答变化。IFN-α处理细胞共检测到346个上调的差异性表达基因(DEGs),其中有93个DEGs在HPPRRSV感染细胞中表达水平显著下降。富集分析这93个下降表达的DEGs,主要分布在免疫应答相关的通路,如“RIG-I样受体信号通路”、“病毒应答”、“刺激应答”。在表达差异的16个抗病毒DGEs中,包括IRG6(RSAD2)、IFI44、ISG20、PKR、LOC100738990(TRIM5)、BST2、OAS1、IFIT1(ISG56)、IRF7、IFIT2、ISG15、LOC100627004(IFITM1)、ISG12(A)(IFI27)、IFITM3、IFIT5,其中15个的表达可以被HP-PRRSV抑制。为了验证以上16个抗病毒DGEs是否具有抑制HP-PRRSV复制的作用,采用siRNA干扰技术下调其表达,然后感染HP-PRRSV,分析病毒复制水平。结果发现PKR、OAS1、IFIT1(ISG56)、ISG15、IFI44、ISG20、BST2、IRF7、IFIT2、LOC100627004(IFITM1)、IFITM3、IFIT5和GBP1均能显著抑制PRRSV的复制。谷氧还蛋白1(glutaredoxin 1,GLRX1)是一种具有抗氧化、信号转导、抗凋亡等多功能的蛋白。RNA-Seq检测结果显示IFN可以显著上调GLRX1的表达,但HP-PRRSV感染能显著抑制其表达。siRNA干扰下调PAMs中GLRX1的表达,HP-PRRSV复制显著增加,说明GLRX1能够抑制HP-PRRSV的增殖。比较感染PRRSV猪和健康猪的各组织中的GLRX1表达差异,发现感染PRRSV猪腹股沟淋巴结、心脏、肺门淋巴结中的GLRX1表达量显著下降,而小肠、肺脏和肌肉中的GLRX1表达量显著上升。上述结果表明PRRSV能够影响猪不同组织的GLRX1的表达。本研究采用RNA-Seq技术筛选了抑制HP-PRRSV复制的宿主限制性因子,并验证了其抗HP-PRRSV复制的作用,为研究HP-PRRSV免疫应答和免疫逃逸提供了基础数据。