喜树碱对小鼠骨髓中性粒细胞影响的研究

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目的探究喜树碱对正常小鼠骨髓中性粒细胞XIAP、TLR4、CXCR2mRNA的表达和细胞凋亡的影响以及对乳腺癌小鼠骨髓中性粒细胞中NE、MMP9、CXCR2蛋白的表达的影响及意义。方法采用荧光定量PCR对不同浓度喜树碱处理1小时下正常小鼠骨髓中性粒细胞XIAP、TLR4、CXCR2mRNA的表达量的变化。使用流式细胞仪采用AnnexinV-FITC/PI双染法检测不同浓度喜树碱处理1小时后小鼠骨髓中性粒细胞的细胞凋亡情况。使用TUBO鼠源乳腺癌细胞建立乳腺癌小鼠模型,然后对乳腺癌小鼠进行灌胃处理。使用Western Blot技术检测对乳腺癌小鼠使用喜树碱灌胃后骨髓中性粒细胞NE、MMP9、CXCR2蛋白的表达。结果通过荧光定量PCR对不同浓度喜树碱加药处理正常小鼠骨髓中性粒细胞1小时后的XIAP、TLR4、CXCR2基因mRNA的表达量进行检测,结果显示喜树碱处理1小时后,骨髓中性粒细胞中XIAP、TLR4、CXCR2基因的mRNA的表达量与空白组相比有所下降,当喜树碱浓度为2 μM和20 μM时,下降最为明显,差异具有统计学意义(P<0.001)。使用流式细胞仪采用AnnexinV-FITC/PI双染法检测不同浓度喜树碱处理1小时后小鼠骨髓中性粒细胞的细胞凋亡,结果显示,在喜树碱浓度为200nM、2 μM、20 μM时,处理一小时后骨髓中性粒细胞并未出现明显的细胞凋亡。细胞的凋亡率随着喜树碱浓度的升高略有增加。通过Western Blot技术检测对乳腺癌小鼠使用喜树碱灌胃后骨髓中性粒细胞NE、MMP9、CXCR2蛋白的表达量的变化,结果显示,与不给药的模型组相比,喜树碱灌胃后乳腺癌小鼠骨髓中性粒细胞中NE、MMP9、CXCR2蛋白的表达量皆有所降低。结论喜树碱能够在一个骨髓中性粒细胞未发生明显凋亡的情况下,下调正常小鼠骨髓中性粒细胞中XIAP、TLR4、CXCR2基因mRNA的表达。喜树碱下调XIAP基因的表达能够促进中性粒细胞发生细胞凋亡。喜树碱下调TLR4基因的表达能够抑制中性粒细胞受到LPS的刺激而从骨髓中释放出来到达炎症部位。喜树碱下调CXCR2基因的表达能够抑制骨髓中性粒细胞受到趋化因子刺激而从骨髓中释放出来。喜树碱还能够下调乳腺癌小鼠骨髓中性粒细胞中NE、MMP9、CXCR2蛋白的表达。喜树碱下调NE、MMP9蛋白的表达将减少中性粒细胞进入肿瘤部位参与肿瘤细胞外部基质重构促进肿瘤增殖的作用。喜树碱下调CXCR2蛋白的表达,将减少受到趋化因子刺激而从骨髓中释放进入肿瘤部位的中性粒细胞的数量,减弱中性粒细胞促进肿瘤生长的作用。
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