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目的:单增李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)以―特洛伊木马‖形式穿越血脑屏障这一方式在细菌性脑炎、脑膜炎的发生发展中具有重要意义,其中细胞迁移和突破血脑屏障是必须的,RhoGTP酶家族是调控细胞迁移的关键因子。本研究拟探讨RhoA在该过程中的表达,观察RhoA对细胞迁移和免疫因子的表达等生物学行为的影响。同时研究RhoA调控巨噬细胞对血脑屏障的影响。方法:1.Tranwell小室迁移实验检测RAW264.7带菌迁移能力;实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time Polymerase Chain Reaction,qRT-PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测Lm感染RAW264.7后IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10在mRNA水平和蛋白水平的变化;qRT-PCR和Western blot检测Lm感染RAW264.7后,RhoGTP酶家族在mRNA水平和蛋白水平的表达差异。2.基因干扰技术干扰RhoA在RAW264.7中的表达,并用qRT-PCR和Western blot验证其效率;Transwell迁移实验检测对照组和干扰组迁移能力的改变;流式细胞术(FCM)检测对照组和干扰组抗原提呈、细胞周期的改变,CCK8以及细胞吞噬实验检测细胞的增殖和吞噬功能的改变;qRT-PCR和ELISA检测对照组和干扰组IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10在mRNA水平和蛋白水平的变化;Western blot检测RhoA下游分子ROCK的表达。3.用鼠脑微血管内皮细胞和星形胶质细胞构建血脑屏障。经Lm感染巨噬细胞的上清刺激后,辣根过氧化物酶(HRP)渗漏实验检测血脑屏障通透性;划痕实验、Transwell实验检测内皮细胞迁移功能;qRT-PCR检测内皮细胞紧密连接蛋白和粘附分子的改变。结果:1.Lm感染RAW264.7后,细胞迁移速度增快;IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10在mRNA水平表达随菌量增加表达量增加;在蛋白水平IL-1β、IL-6、TNF-α表达增高明显,IL-10表达无差异。2.qRT-PCR和Western blot结果显示,RhoGTP酶家族在感染细胞中的表达各不相同,其中RhoA差异最明显。其下游效应分子ROCK2也出现和RhoA一致的变化。3.干扰RAW264.7细胞的RhoA后,能明显抑制RAW264.7细胞的迁移和IL-6、IL-1β的表达,但是对TNF-α、IL-10无明显影响,对细胞的增殖和吞噬能力无影响,可提高RAW264.7细胞的抗原提呈能力。4.干扰RAW264.7细胞的RhoA后,可降低Lm对血脑屏障的破坏作用。干扰RhoA后,血脑屏障通透性降低,内皮细胞迁移能力增强,紧密连接蛋白Occludin、Claudin5升高,粘附分子ICAM-1降低,抑制巨噬胞带菌迁移穿越血脑屏障的细菌数量。结论:RhoA在Lm以“特洛伊木马”形式穿越血脑屏障中具有重要作用,可能通过促进细胞迁移、调控IL-6、IL-1β来破坏血脑屏障内皮细胞间紧密连接、增高血脑屏障通透性、促进巨噬细胞与内皮细胞粘附来穿越血脑屏障,该过程可能通过RhoA/ROCK2信号通路调控,对细菌性脑膜炎、脑水肿等治疗具有积极意义。