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目的:本课题采用昆明种小鼠腹腔注射环磷酰胺(CTX)造成骨髓抑制、白细胞减少模型。通过对外周血白细胞计数、骨髓有核细胞增殖性核抗原PCNA(Proliferating Cell Nuclear Antigen)、Ki-67的蛋白表达的检测,从分子生物学的角度揭示针灸保护造血干细胞、减轻骨髓抑制、提高白细胞数量与PCNA、Ki-67蛋白表达的关系,并初步探讨了针刺与艾灸作用环节的差异。
方法:通过给小鼠注射化疗药物环磷酰胺(CTX)造成骨髓抑制、白细胞减少模型。方法如下:将小鼠按体重、白细胞计数随机分为针刺组、艾灸组、模型组、正常组。正常组按100mg/kg/d腹腔注射生理盐水,其余各组小鼠按100mg/kg/d腹腔注射环磷酰胺,连续3天,从造模后4小时给予针刺和艾灸治疗,选取“大椎”、“膈俞”、“肾俞”、“足三里”等穴位。在治疗的第3天和第6天各处死一批小鼠取材,镜检外周血白细胞计数,’免疫组化法检测骨髓有核细胞增殖相关蛋白PCNA、ki-67的表达。
结果:
1.造模后CTX小鼠外周血白细胞计数动态变化:造模后,与正常组比,针刺组、艾灸组和模型组小鼠白细胞明显下降,有显著性差异。与模型组比,第2天、第3天针刺组、艾灸组无显著差异,说明针刺组、艾灸组和模型组间的白细胞计数变化趋势是一致的。
2.针灸对CTX化疗小鼠白细胞的影响:第3天:与模型组相比,针刺组、艾灸组白细胞数增加,没有显著差异,且都在正常水平以下;第6天:模型组低于正常组,针刺组、艾灸组高于正常组,与模型组比针刺组、艾灸组升高,有显著性差异。总之,与模型组比,针刺组、艾灸组的白细胞数量均显著提高,说明针灸可以提高CTX化疗小鼠白细胞的数量,且第6天优于第3天。
3.针灸对CTX化疗小鼠骨髓有核细胞PCNA蛋白表达的影响:第3天,模型组高于正常组;艾灸组高于模型组,有显著性差异,针刺组高于模型组,无显著性差异,艾灸组优于针刺组。第6天,模型组高于正常组,与模型组比针刺组、艾灸组升高,有显著性差异;针刺组与艾灸组比无显著性差异。总之,针刺和艾灸均提高了CTX化疗小鼠骨髓有核细胞第3天、第6天的PCNA蛋白表达的水平,促进了化疗后骨髓有核细胞的增殖。
4.针灸对CTX化疗小鼠骨髓有核细胞ki-67蛋白表达的影响:第3天,针刺组高于模型组,无显著性差异,艾灸组高于模型组,有显著性差异:第6天,与模型组比针刺组升高,无显著性差异,与模型组比艾灸组升高,有显著性差异;
针刺组和艾灸组的Ki-67蛋白表达水平比第3天有所降低。
结论:
1.研究结果显示,针刺和艾灸可以提升CTX小鼠骨髓有核细胞增殖性核抗原PCNA蛋白的表达水平,促进骨髓有核细胞的增殖,从而改善骨髓抑制,升高外周血白细胞。
2.针刺和艾灸提升了第3天和第6天CTX小鼠骨髓有核细胞Ki-67蛋白的表达水平。但是,第6天针刺组、艾灸组的Ki-67表达水平比第3天有所降低。
3.针灸保护CTX小鼠骨髓细胞,改善骨髓抑制,升高外周血白细胞的作用经过反复研究,结果表明其疗效是确切的,本研究结果又为其治疗机理提供了实验室依据。