为了确定犊牛猝死病原菌制备相应的二联灭活疫苗从具有典型症状的猝死犊牛肝脏组织中分离出了产气荚膜梭菌和大肠杆菌。PCR鉴定该产气荚膜梭菌为A型,大肠杆菌含有irp2,fyua致病因子。小鼠致病性实验表明:分离的两个菌株均很强的致病性。药敏试验结果表明:产气荚膜梭菌对红霉素、氯霉素、先锋Ⅴ号敏感,大肠杆菌对恩诺沙星、头孢唑啉、氯霉素敏感。确诊该起犊牛猝死是由产气荚膜梭菌和大肠杆菌混合感染造成的,敏感药物治疗后,效果明显。常规方法分别制备产气荚膜梭菌类毒素和大肠杆菌二联不含佐剂的以及铝胶佐剂和油佐剂灭活疫苗。多项实验数据表明,二联灭活疫苗稳定性好,使用安全。筛选出产气荚膜梭菌和大肠杆菌最佳的培养时间为7 h和20 h、最佳脱毒条件为0.4%的甲醛120 r/min 37℃6 d和0.4%甲醛120 r/min 37℃88 h。用上述3种二联疫苗分别通过皮下和肌肉途径以0.1 mL、0.2 mL和0.4 mL免疫小鼠,分别应用间接血凝和试管凝集试验检测血清中产气荚膜梭菌和大肠杆菌抗体效价。佐剂组小鼠特异性血清抗体水平均高于无佐剂组,铝胶佐剂组高于白油佐剂组;相同免疫途径,相同佐剂组,随着免疫剂量增加,特异性抗体水平显著上升。用5LD50的产气荚膜梭菌外毒素溶液及大肠杆菌菌液分别对铝胶佐剂组免疫后7 d、14 d和21d的小鼠攻毒。数据显示,不同免疫剂量小鼠均可获得不同程度的保护;而肌肉注射0.4 mL铝胶佐剂疫苗小鼠,在1免后14天,即可获得100%保护。结果表明,肌肉注射0.4 mL铝胶佐剂疫苗,效果最好。应用产气荚膜梭菌和大肠杆菌二联铝胶佐剂灭活疫苗,对妊娠母牛产前3次和2次肌肉免疫,检测妊娠母牛及犊牛的血清抗体效价并观察免疫的临床效果。结果表明,妊娠母牛免疫3次效果好于2次。制备的二联铝胶佐剂灭活疫苗免疫能很好地控制该牛场产气荚膜梭菌病和大肠杆菌病的流行。