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成纤维细胞(fibroblast)由胚胎时期的间充质细胞(mesenchymal cell)分化而来,它是结缔组织(connective tissue)的主要细胞成分。由于相对容易获得,成纤维细胞已被广泛应用于分子和细胞生物学的研究的许多方面。鸡胚成纤维细胞(chickenembryo fibroblast)除了应用于细胞和分子生物学的研究,还被广泛应用于病毒学研究领域,同时也是疫苗生产的重要细胞资源。但鸡胚成纤维细胞和其他体外培养的正常的体细胞一样,生命周期是有限的。在体外培养一段时间后,细胞就会进入增殖抑制状态,即所谓的细胞衰老,最终发生死亡。本研究通过将猿猴病毒40大T抗原基因转染鸡胚成纤维细胞,以期获得能够长期体外培养的细胞。本研究采用酶消化法培养原代鸡胚成纤维细胞,利用脂质体介导的基因转染技术将含有猿猴病毒40大T抗原基因的载体转染原代培养的鸡胚成纤维细胞,再经嘌呤霉素抗性筛选,结果确定最终的抗生素筛选浓度为1.25μg/mL左右,筛选时间为10-12天左右。在此抗性筛选条件下,转染组细胞开始增殖,大约12天左右出现抗性细胞克隆;转染细胞呈现比较典型的梭形或星形细胞。当细胞长满后传代,一般每隔5-7天传代一次,一共传了15代,培养细胞的生长性能尚未发生明显的变化,细胞生长曲线表明,转染细胞增值周期具有典型的S特征,培养1-2天,细胞处于潜伏期,细胞数量缓慢增加,24-48小时后进入指数增长期;接种4-5天后,细胞数量达到高峰,此后,死亡细胞逐渐增多,细胞生长减缓;从转染细胞基因组模板中,扩增出产物为558bp的目的片段。与Hela细胞比较,转染细胞无致瘤性。通过多代次培养、转染细胞培养特性鉴定,说明本实验所获得的鸡胚成纤维细胞株已初步获得了长期传代的能力。