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研究背景与目的:非小细胞肺癌有着高发病率和高死亡率的特点,是导致癌症死亡的主要原因之一。但是非小细胞肺癌的发病机制尚未完全研究清楚。长链非编码RNA（Long non-coding RNAs,lncRNAs）能够影响一系列细胞生物学过程,比如细胞增殖、迁移和分化等,LncRNAs也能够通过上调癌基因的表达水平从而促进癌症的发生发展。天然反义 RNA（Natural antisense transcripts,NATs）作为 lncRNAs 的一种,在包括癌症在内的多种疾病的发展过程中发挥着调控作用。有文献报道,FAM83A能够激活ERK信号通路从而发挥癌基因的作用,并且NAT FAM83A-AS1能够通过上调FAM83A的表达促进非小细胞肺癌细胞增殖转移,但是FAM83A-AS1调节FAM83A的具体机制尚未深入研究。本研究目的在于进一步探究FAM83A-AS1在肺腺癌细胞增殖转移中的具体作用,以及阐明FAM83A-AS1稳定FAM83A表达的具体机制。研究方法:1.利用TCGA数据库分析FAM83A-AS1和FAM83A在肺腺癌和肺鳞癌病人样本中的表达情况,以及与患者预后之间的关系。2.利用qRT-PCR技术检测FAM83A-AS1在肺腺癌细胞株中的表达情况。3.在肺腺癌细胞A549和PC9细胞中过表达或者敲低FAM83A-AS1和FAM83A,然后利用CCK-8实验探究细胞增殖能力的变化。4.在肺腺癌细胞A549和PC9细胞中过表达或者敲低FAM83A-AS1和FAM83A,然后利用transwell小室实验探究细胞迁移和侵袭能力的变化。5.在肺腺癌细胞A549和PC9细胞中分别敲低FAM83A-AS1,利用western blot技术检测内源性FAM83A和磷酸化ERK蛋白水平的变化。6.利用亚细胞定位实验分析FAM83A-AS1和FAM83A在A549细胞中的定位。7.利用RNA酶保护实验探究FAM83A-AS1能否与FAM83A pre-mRNA形成RNA双链结构。8.敲低FBL蛋白后,利用qRT-PCR技术探究FBL蛋白对FAM83A表达量的影响。9.利用RNA pull down实验和RNA结合蛋白免疫沉淀实验探究FAM83A-AS1、FAM83A和FBL三者之间能否结合。10.在A549和PC9细胞中过表达或者敲低FAM83A-AS1和FBL,然后给予RNA聚合酶Ⅱ抑制剂α-鹅膏蕈碱处理,利用qRT-PCR技术探究FAM83A-AS1和FBL对FAM83A降解速度的影响。11.A549细胞中过表达FAM83A-AS1后裸鼠皮下成瘤,观察成瘤大小。研究结果:1.TCGA数据库结果显示,FAM83A-AS1和FAM83A在肺腺癌中高表达,且与病人的不良预后相关。而FAM83A-AS1在肺鳞癌中高表达但与患者的预后无显著相关性。FAM83A-AS1和FAM83A的表达呈正相关。2.qRT-PCR结果显示,与HBE细胞相比,FAM83A-AS1在肺腺癌细胞株中表达量显著升高。3.CCK-8实验证明FAM83A-AS1和FAM83A均能够促进肺腺癌细胞增殖。4.Transwell小室实验证明FAM83A-AS1和FAM83A均能够促进肺腺癌细胞迁移和侵袭。5.Western bolt实验表明FAM83A-AS1能够上调FAM83A和诱导ERK信号通路激活,说明FAM83A-AS1通过影响FAM83A的表达和ERK信号通路促进肺腺癌细胞的生长和转移。6.亚细胞实验表明FAM83A-AS1和FAM83A在细胞质和细胞核中均有分布。7.RNA酶保护实验结果证明FAM83A-AS1能够与FAM83A pre-mRNA形成RNA双链结构以稳定FAM83A的表达。8.qRT-PCR结果显示,FBL蛋白能够稳定FAM83A的表达。9.RNA pull down实验和RNA结合蛋白免疫沉淀实验结果表明FBL能够与FAM83A-AS1和FAM83A 结合。10.α-鹅膏蕈碱实验证明,FAM83A-AS1和FBL均能够减慢FAM83A的降解速度以稳定FAM83A的表达。11.过表达FAM83A-AS1组的瘤体明显大于对照组的瘤体,肿瘤的重量也有相同的趋势。结论:本研究揭示了一种新型的FAM83A-AS1正向调控FAM83A的分子机制。首先我们通过TCGA数据库分析,确定了 FAM83A-AS1和FAM83A能够在肺腺癌中高表达,且两者之间的表达成正相关。高表达FAM83A-AS1和FAM83A的患者总生存期和无病生存期较短。而且在细胞水平上,FAM83A-AS1能够通过稳定FAM83A的表达及激活ERK信号通路促进肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭,这些结果表明FAM83A-AS1在肺腺癌细胞中扮演着癌基因的角色。最后,分子机制研究发现,FAM83A-AS1能够与FAM83A pre-mRNA形成RNA双链结构,使得FAM83A降解速度减慢,从而稳定FAM83A的表达。同时,我们发现RNA结合蛋白FBL也能够降低FAM83A的降解速度,从而稳定FAM83A的表达。而且RNA pull down实验和RNA蛋白免疫沉淀实验证明,FAM83A-AS1能够与FBL结合,进而与FAM83A三者形成复合物。综上所述,我们认为FAM83A-AS1能够通过与FAM83A pre-mRNA形成RNA双链,而FBL与该双链结合能够增强其稳定性,两者共同稳定FAM83A的表达,进而促进肺腺癌细胞的增殖和转移。总之,本研究揭示了一条新的肺腺癌的致癌途径。我们的发现可能为NATs调控肺腺癌发生的分子机制提供新的线索。