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本实验试图建立一个健康长寿的绵羊颗粒细胞系,为基因打靶技术平台提供一个良好的体细胞系,通过摸索不同的原代培养途径,建立了一套稳定的绵羊颗粒细胞培养体系。在此基础上,转染pLPC-hTERT,通过嘌呤霉素的筛选获得阳性细胞系。利用染色体核型分析和软琼脂生长试验等细胞生物学手段检测,结果表明阳性细胞没有发生恶性转化。利用RT-PCR、TRAP-银染法和southern等分子生物学手段检测,结果表明阳性细胞中存在有外源的hTERT,其端粒酶的活性有所增强,端粒片断得到了较好的保护,通过以上试验,我们最终建立了一个稳定的绵羊颗粒细胞培养体系,并获得了四个端粒酶活性增强,细胞寿命延长,且没有发生恶性转化的阳性细胞系,为基因打靶提供了一个健康长寿的细胞材料。