论文部分内容阅读
目的:药物诱发获得性LQTS的机制主要有两种，一是直接阻滞hERG通道，二是诱导hERG蛋白转运障碍，减少hERG膜蛋白表达;已有研究表明有些药物可以通过与hERG通道上氨基酸位点结合直接阻滞hERG通道，也可在hERG蛋白合成过程中与之通过作用位点结合诱导蛋白转运障碍。我们本课题研究小檗碱和白藜芦醇与hERG通道作用的结合位点，探讨白藜芦醇逆转小檗碱对hERG通道的抑制作用的机制。 方法:(1)采用脂质体转染法，瞬时转染WT-hERG，Mutant-hERG基因于HEK293细胞系，获得野生型和突变型hERG细胞。(2)采用全细胞膜片钳技术和Western Blot技术，分别记录野生型及突变型hERG通道电流及蛋白表达水平。 结果:(1)膜片钳实验结果得出小檗碱浓度依赖性地抑制野生型hERG电流，且IC50=2.991μmol/L。(2)在+40mV电压下，10μmol/L小檗碱瞬时给药对WT-hERG电流的抑制率为81.44％，分别大约是小檗碱对Y652A-hERG和F656V-hERG电流的抑制率的1.9倍和2.4倍，抑制作用明显减弱。(3)1μmol/L和10μmol/L小檗碱孵育24h后均可明显抑制WT-hERG蛋白表达及通道电流，对hERG电流的最大抑制率分别为45.00％和84.53％。(4)10μmol/L小檗碱孵育给药24 h后对F656V/Y652A-hERG蛋白表达及通道电流无明显作用。(5)10μmol/L白藜芦醇瞬时给药可显著抑制WT-hERG和Y652A-hERG通道电流，而F656C-hERG通道电流无明显变化。(6)10μmol/L小檗碱和10μmol/L白藜芦醇共孵育给药24 h后，hERG通道蛋白表达量较小檗碱单独孵育组明显增加。 结论:小檗碱可显著抑制hERG通道电流及蛋白表达，造成hERG通道功能缺陷;小檗碱诱导hERG蛋白转运障碍可能与通道上第656位的苯丙氨酸(Phe656)和第652位的酪氨酸(Tyr652)位点结合有关;白藜芦醇的作用位点是Phe656，其可逆转小檗碱引起的hERG通道功能缺陷，提示白藜芦醇逆转小檗碱诱导的hERG通道功能缺陷的可能作用机制是竞争药物作用位点。