BI-1与Bcl-2或Bcl-X<,L>相互作用的酵母双杂交研究

来源 :哈尔滨医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:robinchen
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以往研究表明BI-1(Baxinhibitor-1)可能与Bcl-2、Bcl-XL发生联系,从而调节细胞凋亡过程,并能够抑制Bax引起的细胞凋亡。为探讨BI-1与Bcl-2、Bcl-XL在凋亡信号通路中的作用,应用酵母双杂交系统来验证BI-1与Bcl-2、BI-1与Bcl-XL间是否存在直接相互作用。 本研究以人正常肺组织BI-1作为酵母双杂交系统的诱饵,以人正常肺组织Bcl-2、Bcl-XL作为猎物,分别构建了诱饵蛋白重组体pGBKT7-BI-1和猎物蛋白重组体pGADT7-Bcl-2、pGADT7-Bcl-XL,将pGBKT7-BI-1与pGADT7-Bcl-2、pGBKT7-BI-1与pGADT7-Bcl-XL分别共转化酵母AH109菌株,使得BI-1与Bcl-2、BI-1与Bcl-XL在酵母细胞中共表达,通过检测酵母AH109菌株中的报告基因ADE2、HIS3、LacZ的表达与否来判断BI-1与Bcl-2或Bcl-XL间的相互关系。 结果表明,诱饵蛋白重组体pGBKT7-BI-1和猎物蛋白重组体pGADT7-Bcl-2、pGADT7-Bcl-XL不存在自身激活作用,并能够在酵母细胞中成功表达,即三种重组体能够应用于酵母双杂交系统分析其相互作用。此外,pGBKT7-BI-1与pGADT7-Bcl-2、pGBKT7-BI-1与pGADT7-Bcl-XL共转化的酵母菌落能够在SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp平板上生长,β-半乳糖苷酶活性分析显示该菌落于30℃温育2小时后呈现蓝色,即酵母AH109菌株中的报告基因ADE2、HIS3、LacZ已被激活。 综合分析上述结果可以推断,BI-1可能通过与Bcl-2、BcI-XL发生直接的相互作用来调节细胞凋亡,为进一步探讨BI-1与Bcl-2、Bcl-XL相互作用发挥功能的靶点奠定了基础。
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