【摘 要】
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鸡球虫病（Chicken coccidiosis）是一种全球性的胞内寄生性原虫病。其中,柔嫩艾美尔球虫（Eimeria tenella,E.tenella）是致病性最强的一种,常寄生于鸡盲肠,病鸡出现腹泻便血等症状,死亡率高,鸡球虫病给养禽业造成巨大经济损失。目前球虫病防控主要依赖化学药物及疫苗,但是化学药物滥用会导致药物残留、耐药性等问题,疫苗又面临安全性、虫株易变异、疫苗副反应等问题。而中草药
【基金项目】
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吉林省教育厅科技研究项目（JJKH20210366KJ）
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鸡球虫病（Chicken coccidiosis）是一种全球性的胞内寄生性原虫病。其中,柔嫩艾美尔球虫（Eimeria tenella,E.tenella）是致病性最强的一种,常寄生于鸡盲肠,病鸡出现腹泻便血等症状,死亡率高,鸡球虫病给养禽业造成巨大经济损失。目前球虫病防控主要依赖化学药物及疫苗,但是化学药物滥用会导致药物残留、耐药性等问题,疫苗又面临安全性、虫株易变异、疫苗副反应等问题。而中草药是天然药物,具有抗菌消炎、杀虫、药物残留少、毒副作用较小、不易产生耐药性等特点。五倍子、余甘子、板栗等中药水解产物为单宁酸。单宁酸具有抗氧化、抗炎消肿、止咳、固涩收敛等多种作用。本研究查阅大量文献选择超声波辅助提取法,提取了单宁酸,建立人工感染柔嫩艾美尔球虫模型,探索单宁酸抑制球虫机理研究。1.通过外观形态观察鉴定五倍子、余甘子、板栗,超声波辅助提取法提取五倍子、余甘子、板栗中单宁酸,Folin-Denis法检测单宁酸,紫外分光光度计测定吸光度,单宁酸浓度在0.0-1.0mg/m L范围内,建立标准曲线,吸光度与单宁酸的浓度符合回归方程y=0.1171x-0.001838,R~2=0.9982。y为单宁在760nm波长处测定吸光度值;x为单宁标准溶液浓度。经计算五倍子单宁酸提取率为61.24%,余甘子单宁酸提取率为13.26%,板栗单宁酸提取率为25.48%。2.为确定五倍子、余甘子、板栗提取单宁酸抗鸡球虫作用效果,本研究通过不同浓度单宁酸体内抗虫作用,五倍子、余甘子、板栗均有0.005、0.01、0.02、0.04、0.06g/m L不同浓度,西药、中药复方作为对照,30日龄雏鸡,每只感染柔嫩艾美尔球虫雏鸡按100μL/d给药。记录每组雏鸡相对增重率、存活率、卵囊值、病变值,计算各组抗球虫指数（Anticoccidial index,ACI）,结果显示五倍子、余甘子、板栗在0.02g/m L时ACI最高,分别为155.56、164.42、178.30,抗球虫效果良好。为探究最佳抗球虫效果时药物浓度,五倍子、余甘子、板栗均设0.018、0.2、0.22g/m L浓度组,计算每组ACI,结果依然显示14日龄雏鸡攻虫治疗,单宁酸为0.02g/m L灌服100μL给每只鸡时,五倍子抗球虫效果中等,ACI为180,余甘子ACI为160.1,板栗ACI为175.73,余甘子、板栗抗球虫效果中等;0.02g/m L五倍子、余甘子、板栗在12-72h均能抑制E.tenella卵囊孢子化。3.为探究单宁酸对E.tenella增值作用的影响,通过荧光定量PCR检测球虫DNA含量,从而计算出单宁酸抑制E.tenella发育最佳浓度。攻虫后12-72h,三种药物提取单宁酸为0.1μg/m L时MDBK细胞相对存活率高于90%。子孢子寄生于MDBK细胞,在宿主细胞中逐渐发育,逐步发育成滋养体、第一代裂殖子、第二代裂殖子,之后从宿主细胞中释放后第二代裂殖子逐步死亡,但是MDBK细胞培养基营养有限,攻虫72h后,大量细胞死亡。所以从24h、48h、72h时测定DNA含量。结果显示三种中草药提取单宁酸均有良好的抑制子孢子发育作用,且三种单宁酸在相同剂量时无显著差异（P＞0.05）,药物浓度为0.1μg/m L时不仅对MDBK细胞低毒且有良好抑制球虫增殖作用。
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