有氧运动和高脂饮食对小鼠血脂代谢和内质网应激的影响

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目的:1.探讨有氧运动和高脂饮食对机体脂质代谢的影响。2.探讨有氧运动和高脂饮食对机体动脉粥样硬化的影响。3.探讨有氧运动和高脂饮食对肝脏组织内质网应激水平的影响。方法:本实验以40只健康雄性BALB/c八周龄小鼠为实验对象。随机分为四组:正常饮食对照组(N组,n=10);高脂饮食组(H组,n=10);有氧运动组(E组,n=10);高脂+运动组(HE组,n=10)。适应性喂养3天后,将所有小鼠禁食12h,尾静脉取血,分离血清,-80℃存放待测。取血后第二天开始对不同组进行不同干预:N组小鼠正常饮食自由活动;H组小鼠高脂饮食自由活动;E组小鼠正常饮食并进行无负重游泳运动;HE组小鼠高脂饮食并进行无负重游泳运动。游泳方案是:每天上午游泳1小时,每周训练5天,共8周。所有小鼠每隔一周测量一次体重.实验最后一天禁食12h,次日取血,分离血清。检测实验前后小鼠血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、血糖(GLU)、神经鞘磷脂(SM)、血乳酸(LA)的含量。取血之后用1%异戊巴比妥钠对小鼠进行麻醉,剖开胸腔,取出肝脏和胆囊,观察肝脏和胆囊的形态并利用Western Blotting的方法检测肝脏组织中的葡萄糖调节蛋白-78(GRP78)的水平。再用4%的多聚甲醛对小鼠进行固定,分离小鼠的主动脉弓和胸腹主动脉,观察动脉粥样硬化(AS)斑块情况。结果:1.体重变化:实验前,各组小鼠体重无显著差别(P>0.05)(数据见表4-1)。8周实验后,H组体重(前20.64±2.32、后32.72±1.44)g显著性提高(见表4-1,图4-1),差异有统计学意义(P<0.05)。而E和HE组的体重虽然有所降低,但差异无统计学意义(P>0.05)。与其它组相比E组体重显著性提高。2.8周实验前后,血脂水平的变化:实验前,各组小鼠血脂各项指标水平基本相同,无显著性差异,(P﹥0.05)(见表4-1)。实验后:(1)甘油三酯(TG)的变化:与实验前相比:N组变化不明显(前0.88±0.29、后1.01±0.37)mmol/L,(P>0.05);H组(前0.95±0.2、后0.64±0.16)mmol/L,含量显著降低,(P<0.01);E组(前0.84±0.30、后0.77±0.27)mmol/L,有所降低但差异无统计学意义(P>0.05);HE(前0.82±0.17、后0.52±0.18)mmol/L含量显著降低,差异有统计学意义(P<0.01)。与N组相比,各组TG的含量均显著性降低,(P<0.05)。(2)胆固醇(TC)含量的变化:与实验相前比:N组TC变化不大(前3.36±1.21、后2.51±0.52)mmol/L,(P>0.05);H组(前2.35±0.69、后4.46±0.45)mmol/L显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);E组TC(前2.79±0.84、后1.62±0.47)mmol/L水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);HE组TC(前2.17±0.39、后3.71±0.79)水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与N组相比,H组TC含量显著升高(2.51±0.52、4.46±0.45)mmol/L,(P<0.05); E组显著低于N组(2.51±0.52、1.62±0.47)mmol/L,(P<0.05),更低于H组:(1.62±0.47、4.46±0.45)mmol/L,(P<0.01);HE组显著低于H组(3.71±0.79、4.46±0.45)mmol/L,(P<0.05);HE组与E相比TC含量显著升高(3.71±0.79、1.62±0.47)mmol/L,(P<0.01)。(3)血糖(GLU)含量的变化:实验前后,H组血糖含量(前5.30±1.84mmol、后6.27±1.25)mmol/L,升高不显著(P>0.05);E组血糖含量(前5.07±1.33、后2.38±1.03)mmol/L,含量显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);HE组血糖含量(前5.68±1.68、后2.78±1.08)mmol/L显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);组间比较:H与N相比血糖含量有所升高,但不显著。E与N组相比血糖含量显著降低(2.38±1.03、5.18±1.55)mmol/L,(P<0.05);HE组与N组相比血糖含量显著降低,(2.78±1.08、5.18±1.55)mmol/L,(P<0.05);HE组与H组相比血糖含量显著降低(2.78±1.08、6.27±1.25)mmol/L,(P<0.05);HE组与E组相比血糖含量变化不明显(2.78±1.08、2.38±1.03)mmol/L,(P<0.05)。(4)神经鞘磷脂的变化:实验后:E组SM(前12.74±2.82、后9.84±2.08)mmol/L含量显著降低,(P<0.01);其余各组实验前后SM均无显著性变化。与N组相比:H组SM含量升高不显著(13.12±2.75、15.13±1.98)mmol/L,(P>0.05);E组SM含量显著降低(13.12±2.75、9.84±2.08)mmol/L,(P<0.05);HE组SM含量变化不大。组间比较:HE组与H组相比SM含量变化不大(14.71±3.39、15.13±1.98)mmol/L,(P>0.05);与E相比,HE组SM含量显著升高(9.84±2.08、15.13±1.98)mmol/L,(P<0.05)。与H相比,E组SM非常显著性降低(15.13±1.98、9.84±2.08)mmol/L,(P<0.01)。3.血乳酸的变化:实验前后,各组小鼠血乳酸水平没有明显改变,此指标用于运动强度控制的参考值。4.8周实验后,各组小鼠解剖后通过主动脉弓和腹主动脉检查显示(见图4-2,4-3):N组:正常主动脉透明、干净,内膜光滑,层次清晰,厚薄均匀,内膜、中膜及外膜未见异常;没脂质沉淀和斑块形成。E组:主动脉弓上没有斑块,很透明、干净,内膜光滑,层次清晰,厚薄均匀,内膜、中膜及外膜未见异常。H组:主动脉弓不透明,内膜不光滑,可观察到明显的脂质沉积斑块。HE组:主动脉弓跟正常组比起来有些不透明,但比高脂饮食组要透明的多,动脉弓上脂质斑块也很少5.8周实验后,通过Western Blotting(蛋白质印迹)的方法检测肝脏组织中GRP78的水平,分析得出的条带显示(见图4-4):H组与N组小鼠相比内质网应激标志蛋白grp78明显升高,HE组比E组的内质网应激标志蛋白grp78高,但没有H组那么高;E组与N组小鼠相比内质网应激标志蛋白grp78水平变化不明显;而HE内质网应激标志蛋白grp78明显低于H组。6.8周实验后,经解剖发现:H组80%(8/10)的小鼠的肝脏的颜色与N组比颜色发白(见图4-5,4-6),并且在70%(7/10)的小鼠的胆囊中发现有白色的小颗粒(见图4-7,4-8)。而E组和HE组小鼠的肝脏和胆囊中就没有发现有次症状。此现象有可能是脂肪肝和胆结石。结论:1.有氧运动可明显改善高脂饮食所导致的小鼠血脂代谢紊乱。2.有氧运动可减少高脂饮食导致的动脉粥样硬化斑块的形成。3.有氧运动不足以使正常机体发生内质网应激但可以显著降低高脂饮食小鼠内质网应激水平。
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