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大白菜虽是原产我国的重要蔬菜作物,但春大白菜育种国内起步较晚,生产上大多使用从日本、韩国进口的种子。虽有一定的耐抽薹,但不抗病毒病。在大白菜生产中,先期抽薹和后期病毒病重已经成为亟待解决的问题。采用常规育种方法培育耐抽薹、抗病毒大白菜品种年限长、效率低。因此,结合常规育种方法,采用基因工程技术克隆相关基因,控制植物的开花和病毒的复制,创新大白菜抗病毒、耐抽薹种质材料,进而育成具有自主知识产权的商品性好、抗病毒病、冬性较强不易抽薹的春大白菜育种材料和品种,打破国内春大白菜种子依靠进口的局面,均具有重要经济价值和现实意义。本研究以中国春大白菜为材料,在采用RT-PCR技术克隆的TuMV-NIb、LFY基因的基础上,构建成反义双价基因的植物表达载体,利用TuMV-NIb基因的目的是抵抗芜菁花叶病毒,LFY基因的目的是延迟植物的开花时间。通过遗传转化研究,建立了大白菜遗传转化系统,为利用TuMV-NIb与LFY双价基因,抵抗大白菜芜菁花叶病毒和抑制抽薹奠定基础,培育抗病毒和耐抽薹春大白菜新种质。并获得了转TuMV-NIb、LFY基因的阳性植株。主要研究结果如下:1.近几年来,TuMV不同株系的核苷酸序列得到测定。病毒复制相关蛋白基因转入烟草发现,对TuMV有极强的抗性。LFY基因处于成花相关基因调控网络的关键位置,属于开花决定基因。通过基因工程手段控制花发育或开花时间基因的表达,可改变受体植物的花期,直接控制作物生育期。利用克隆的TuMV-NIb、LFY基因,通过酶切、连接、转化,重组质粒的PCR扩增、酶切鉴定,构建成双价反义基因的植物表达载体;采用冻融法转化农杆菌LBA4404,获得了工程菌株。2.研究了基因型、激素配比等影响大白菜再生的限制因素,确定了以“青3福山”大白菜带柄子叶为外植体的分化培养基为:MS+6-BA2mg/L+NAA0.5mg/L+TDZ0.1mg/L+AgNO3 4mg/L;在25℃,16/8hr（光/暗）下培养,不定芽的分化频率均在85%以上3.完善了农杆菌介导的大白菜叶盘法遗传转化体系,确定了菌液浸染浓度为6.0,浸染5min;卡那霉素适宜筛选压力为10mg/L。获得的转化条件是:带柄子叶外植体预培养2-3d,农杆菌浸染外植体5min;共培养时间为2～3d,经过7～10d恢复培养,4～6周的选择培养后转到生根培养基上生根。最终在“青3福山”大白菜上获得了5株抗性植株,得到经PCR检测阳性株转化率为3.3‰。