皖南蝮蛇抑瘤组分Ⅰ急性毒性与抑制人胃癌细胞SGC-7901迁移能力的研究

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目的:分析皖南蝮蛇抑瘤组分-I(Agkis-trodon halys venom antitumor componentⅠ,AHVAC-Ⅰ)的急性毒理反应,评估AHVAC-Ⅰ作为一种新的抗肿瘤药物使用的安全性。探究AHVAC-I对于人胃癌细胞SGC-7901迁移能力的影响,为其在胃癌治疗方面的开发应用提供实验支持。方法:采用DEAE-52阴离子交换法从皖南蝮蛇粗毒分离纯化出AHVAC-Ⅰ,备后续实验使用。将120只清洁级小鼠随机分为对照组与AHVAC-Ⅰ剂量组(1 mg/kg、1.44mg/kg、2.06mg/kg、2.96 mg/kg、4.25 mg/kg),其中每组20只小鼠;腹腔注射给药后,连续观察7天,记录小鼠死亡只数并观察其行为变化;采用半数致死量法,计算AHVAC-I的LD50值;存活的实验动物在1周观察期后摘除眼球取血,检测小鼠肝肾功能;解剖小鼠,重要脏器HE染色后观察其病理改变,以综合评估AHVAC-I的急性毒理反应。为探究AHVAC-I对胃癌细胞迁移能力的影响,以人胃癌细胞株SGC-7901作为实验对象,通过CCK-8实验,得到AHVAC-Ⅰ的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50);根据IC50值进行AHVAC-I浓度分组,采用Ttranswell、细胞划痕实验检证AHVAC-Ⅰ对细胞迁移能力的影响;运用免疫印迹法检测AHVAC-I处理后SGC-7901细胞中RAI14的表达水平,初步探讨AHVAC-I抑制胃癌细胞SGC-7901迁移能力的分子机制。结果:1、成功从皖南蝮蛇蛇毒粗毒中分离并纯化出AHVAC-Ⅰ组分。2、AHVAC-Ⅰ经腹腔注射小鼠的LD50为2.585mg/kg,其95%可信限为(2.233~3.069)mg/kg;3、血清学检测表明与对照组相比,中、高剂量组小鼠血清中ALT、AST、CR、BUN水平显著升高(P<0.05),而低剂量AHVAC-Ⅰ组小鼠血清中的ALT、AST、CR和BUN均无明显变化。4、病理检查发现中、高剂量组小鼠的肝、肾有变性损伤,而低剂量AHVAC-Ⅰ组小鼠肝脏、肾脏、心肌均未发现明显的病理变化。5、以0、5、10、15μg/ml AHVAC-Ⅰ处理SGC-7901细胞,穿膜细胞数显著少于对照组。6、以0、5、10、15μg/ml AHVAC-Ⅰ处理SGC-7901细胞,细胞对于划痕区的修复能力显著下降。结论:1、低剂量AHVAC-Ⅰ不会引起小鼠严重的急性毒性反应,中高剂量的AHVAC-Ⅰ对小鼠的主要毒性靶器管为肝脏与肾脏。2、AHVAC-Ⅰ能够抑制细胞SGC-7901的迁移。
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