EB病毒为自然界广泛存在的疱疹病毒科DNA致瘤病毒，人群感染率高达90％以上，是传染性单核细胞增多症的病原体，同时与某些人类恶性肿瘤如鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)、Burkitts淋巴瘤(BL)、霍奇金淋巴瘤以及免疫缺陷病人淋巴瘤等的发生密切相关。近三十年来研究表明，世界范围内约1.3-18％的胃癌与EBV感染密切相关，这部分胃癌称为EB病毒相关胃癌。　　 EBVaGC具有独特的临床病理特征，然而关于EBVaGC的预后意见不一。目前认为肿瘤的预后同时取决于肿瘤本身的恶性程度和宿主免疫系统的抵抗作用。因此，研究EBVaGC患者的肿瘤免疫状态有助于我们进一步理解EBVaGCC的生物学行为和临床病理特征，为EBVaGC免疫治疗提供理论依据。　　 肿瘤免疫可分为全身免疫和局部免疫。肿瘤局部免疫作为肿瘤与机体作用的主要部位，在患者体内处于机体免疫系统与肿瘤相互作用的最前沿，一定程度上反映机体抗肿瘤反应的强度和总体水平。肿瘤在机体的免疫监视下生长，在肿瘤局部存在机体抗肿瘤免疫反应和肿瘤微环境免疫抑制作用。研究表明，恶性肿瘤患者局部免疫学的改变与肿瘤的演变与病程密切相关，患者的免疫功能由早期的活跃状态发展到不同程度的免疫抑制，病期越晚，免疫抑制越强。研究发现，与EBV密切相关的鼻咽癌患者外周血的免疫反应可被激活，而肿瘤局部免疫状态受到抑制，因此推测肿瘤局部免疫状态受到抑制而非全身免疫缺陷可能是鼻咽癌的发病机制之一。那么同为上皮性肿瘤的EBVaGC的肿瘤局部免疫状态怎样?是否存在免疫抑制?　　 EBVaGC组织中有明显的淋巴细胞浸润倾向，而对于EBVaGC中肿瘤浸润免疫细胞的亚型及其在肿瘤免疫中的作用研究较少。目前仅有4篇文献发现肿瘤浸润免疫细胞多数为具有增殖活性的CD8+细胞毒性T细胞，但未见有关EBVaGC肿瘤局部免疫抑制因素的研究。　　 我们课题组共收集了676例普通胃癌和26例残胃癌手术切除标本，用EBER原位杂交方法分别筛选出46例(6.8％)和8例(34.6％)EBVaGC，并对EBVaGC的临床病理特征和潜伏类型进行了研究；本课题拟在此基础上，采用免疫组化方法及末端脱氧核苷酸转移酶介导核苷酸缺口标记技术(Tdt-mediated-dUTP nickend labeling，TUNEL)研究EBVaGC组织中的肿瘤局部免疫状态及其与肿瘤细胞凋亡的关系。　　 本课题分为以下二部分：　　 第一部分普通胃癌中EB病毒相关胃癌肿瘤局部免疫与肿瘤细胞凋亡　　 目的：　　 1.研究普通胃癌中EBVaGC组织中的肿瘤局部免疫状态。　　 2.探讨普通胃癌EBVaGC组织中的肿瘤局部免疫状态与肿瘤细胞凋亡的关系。　　 材料和方法：　　 1.采用免疫组化方法检测普通胃癌EBVaGC中CD3、CD79α、CD56、Fascin标记的TIL-T细胞、B细胞、NK细胞、DC细胞，并对CD3+TIL-T细胞进行CD4和CD8亚群分析。　　 2.采用免疫组化方法检测Ki67、IL-1β、颗粒酶B、FasL、IFN-γ/TNF-α在普通胃癌EBVaGC中CD8+T细胞的表达，研究CD8+T细胞数量增多的原因和功能状态。　　 3.采用TUNEL技术检测普通胃癌EBVaGC肿瘤细胞的凋亡，并通过免疫组化方法检测IL-10、FoxP3、Survivin、NF-κBp65、FasL在肿瘤细胞的表达，探讨普通胃癌EBVaGC组织中的肿瘤局部免疫状态与肿瘤细胞凋亡的关系。　　 结果：　　 1.普通胃癌EBVaGC中的CD3+TIL-T细胞、CD79α+B细胞和CD56+NK细胞数量均比EBVnGC多(P＜0.001，P=0.003，P=0.04)，肿瘤浸润淋巴细胞主要为CD3+TIL-T细胞。EBVaGC中CD8+T细胞的数量比EBVnGC多(P＜0.001)，而CD4+T细胞数量两组间差别无统计学意义(P＞0.05)。EBVaGC中CD3+TIL-T细胞多数为CD8+T细胞。EBVaGC中CD4/CD8比值明显低于EBVnGC组(P=0.004)。EBVaGC中的Fascin+的树突细胞数量、FoxP3+的CD4+CD25+Treg细胞数量均比EBVnGC多(P=0.012，P=0.033)。　　 2.普通胃癌EBVaGC中Ki67、IL-1β、Granzyme B、IFN-γ阳性的CD8+T细胞百分率均比EBVnGC中高(P=0.001，P=0.038，P=0.003，P＜0.001)。而FasL蛋白在CD8+T细胞的阳性表达率和TNF-α平均阳性CD8+T细胞百分率在EBVaGC和EBVnGC中的差异无统计学意义(P值均＞0.05)。EBVaGC中的IL-10平均阳性淋巴细胞百分率比EBVnGC中高(P=0.004)。　　 3.普通胃癌EBVaGC的肿瘤细胞凋亡指数低于EBVnGC肿瘤细胞的凋亡指数(P=0.013)。Survivin、NF-κBp65、FasL在肿瘤细胞的表达强度均比EBVnGC中高(P=0.034，P=0.012，P=0.03)，Survivin与LMP2A、NF-κBp65与LMP2A、Survivin与NF-κBp65在EBVaGC中肿瘤细胞的表达均有关联性。EBVaGC中的肿瘤细胞IFN-γ、IL-1β、IL-10平均阳性细胞百分率均比EBVnGC中高(P＜0.001，P=0.026，P=0.001)，而TNF-α每高倍视野内TNF-α平均阳性肿瘤细胞百分率在EBVaGC和EBVnGC中差异无统计学意义(P＞0.05)。　　 结论：　　 1.在EBVaGC肿瘤局部免疫中存在免疫激活和免疫抑制两方面的作用，在进展期EBVaGC中免疫抑制作用可能更明显。　　 2.EBVaGC中肿瘤细胞凋亡减少可能是由于：a.进展期EBVaGC中肿瘤免疫抑制作用可能更明显；b.EBV编码的蛋白LMP2A有可能通过上调Survivin的表达抑制肿瘤细胞的凋亡。　　 第二部分残胃癌中EB病毒相关胃癌肿瘤局部免疫与肿瘤细胞凋亡　　 目的：　　 1.研究残胃癌EBVaGC组织中的肿瘤局部免疫状态。　　 2.探讨残胃癌EBVaGC组织中的肿瘤局部免疫状态与肿瘤细胞凋亡的关系。　　 材料和方法：　　 1.采用免疫组化方法检测残胃癌EBVaGC中CD3、CD79α、CD56、Fascin标记的TIL-T细胞、B细胞、NK细胞、DC细胞，并对CD3+TIL-T进行CD4和CD8亚群分析。　　 2.采用免疫组化方法检测Ki67、IL-1β、颗粒酶B、FasL、IFN-γ/TNF-α在残胃癌EBVaGC中CD8+T细胞的表达，研究CD8+T细胞数量增多的原因和功能状态。　　 3.采用TUNEL技术检测残胃癌EBVaGC肿瘤细胞的凋亡，并通过免疫组化方法检测IL-10、FoxP3、Survivin、NF-κBp65、FasL在肿瘤细胞的表达，探讨残胃癌EBVaGC组织中的肿瘤局部免疫状态与肿瘤细胞凋亡的关系并比较普通胃癌EBVaGC和残胃癌EBVaGC中的肿瘤局部免疫状态和肿瘤细胞凋亡的异同。　　 结果：　　 1.残胃癌EBVaGC中的CD3+TIL-T细胞、CD79α+B细胞和CD56+NK细胞数量均比EBVnGC多(P=0.017，P=0.014，P=0.008)，肿瘤浸润淋巴细胞主要为CD3+TIL-T细胞。残胃癌EBVaGC中的CD8+T细胞数量比EBVnGC多(P=0.007)，而EBVaGC中CD4+T细胞数量比EBVnGC少(P=0.048)。EBVaGC中CD3+TIL-T细胞多数为CD8+T细胞。EBVaGC中CD4/CD8比值明显低于EBVnGC组(P=0.005)。EBVaGC中的Fascin+的TIDC数量、FoxP3+的CD4+CD25+Treg细胞数量均比EBVnGC多(P=0.035，P=0.028)。　　 2.残胃癌EBVaGC中Ki67、IL-1β、颗粒酶B、IFN-γ阳性的CD8+T细胞百分率均比EBVnGC高(P=0.006，P=0.003，P=0.027，P=0.048)。而FasL蛋白在CD8+T细胞的阳性表达率和TNF-α平均阳性CD8+T细胞百分率在EBVaGC和EBVnGC中的差异无统计学意义(P值均＞0.05)。EBVaGC中的IL-10平均阳性淋巴细胞百分率比EBVnGC中高(P=0.040)。　　 3.残胃癌EBVaGC的肿瘤细胞凋亡指数低于EBVnGC肿瘤细胞的凋亡指数(P=0.042)。EBVaGC中的Survivin的表达强度比EBVnGC中高(P＜0.001)，而NF-κBp65、FasL、IFN-γ、TNF-α、IL-1β、IL-10在残胃癌EBVaCC和EBVnGC中表达差别均无统计学意义(P＞0.05)。　　 4.残胃癌中EBVaGC中的CD4+T细胞数量和CD4/CD8比值明显比普通胃癌EBVaGC中小(P=0.006，P=0.012)。Survivin在残胃癌EBVaGC中肿瘤细胞的表达强度强于普通胃癌EBVaGC(P＜0.001)。　　 结论：　　 残胃癌EBVaGC的肿瘤局部免疫状态与普通胃癌EBVaGC相似，但具有更明显的免疫抑制作用，可能是残胃癌中EBVaGC高发的原因之一。