【摘 要】
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香兰素是一种非常重要的香料,它广泛用于食品,制药和化学工业。天然香兰素难以满足需求,而化学香兰素会产生污染并对健康产生不利影响,因此生物香兰素倍受欢迎。近年来,许多研究利用基因工程技术和酶催化制备香兰素。类胡萝卜素裂解酶具有催化芳香族化合物转化为香兰素的能力。本研究通过BLASTP从不同细菌中寻找到了五种类胡萝卜素裂解酶的基因(HsCCO、RbCCO、KsCCO、AvCCO和RaCCO),并将其转
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香兰素是一种非常重要的香料,它广泛用于食品,制药和化学工业。天然香兰素难以满足需求,而化学香兰素会产生污染并对健康产生不利影响,因此生物香兰素倍受欢迎。近年来,许多研究利用基因工程技术和酶催化制备香兰素。类胡萝卜素裂解酶具有催化芳香族化合物转化为香兰素的能力。本研究通过BLASTP从不同细菌中寻找到了五种类胡萝卜素裂解酶的基因(HsCCO、RbCCO、KsCCO、AvCCO和RaCCO),并将其转入大肠杆菌中进行表达,筛选得到了具有高催化活性的HsCCO和RbCCO。同时发现了类胡萝卜素裂解酶的可溶性和最适pH可能与氨基酸序列有关。对两种酶的酶学性质进行研究,HsCCO的最适温度和最适pH分别为40℃和pH 7.0,在pH 6.5-10和温度约25℃时相对稳定;RbCCO的最适温度和最适pH分别为35℃和pH 9.0,在pH 6-11和温度25℃至30℃时相对稳定。HsCCO对异丁香酚和4-乙烯基愈创木酚的动力学常数Km分别为1.55 m M和1.65 m M,Vmax为74.09 nmol min-1mg-1和27.91nmol min-1mg-1。相应的异丁香酚和4-乙烯基愈创木酚的RbCCO的动力学常数Km为2.24m M和0.85 m M,Vmax为76.48 nmol min-1 mg-1和19.96 nmol min-1 mg-1。HsCCO转化4-乙烯基愈创木酚的能力略高于RbCCO。5 Mm Ca2+对HsCCO催化异丁香酚有促进作用,两种酶对有机溶剂的耐受性较弱。HsCCO全细胞催化异丁香酚和4-乙烯基愈创木酚的香兰素转化率分别为80%和55%,香兰素浓度为1.22 g/L和0.84 g/L;RbCCO全细胞催化异丁香酚和4-乙烯基愈创木酚的香兰素转化率分别为75%和58%,香兰素浓度为1.14 g/L和0.88 g/L。本研究有助于进一步了解类胡萝卜素裂解酶的性质和作用,同时为香兰素的生物合成提供了新的参考。
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