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喹乙醇是一种化学合成的具有广谱抗菌作用的药物,主要用于预防和治疗细菌感染性疾病,也常用作为饲料添加剂促进动物生长。然而,喹乙醇具有中等至明显的蓄积毒性、遗传毒性和诱变性,不合理的使用会造成在动物性食品中残留,可能对人类的健康造成潜在危害。为了建立快速灵敏的检测喹乙醇残留免疫分析方法,本研究制备了喹乙醇多克隆抗体,主要研究内容和结果包括以下方面:
通过琥珀酸酐法合成了具有喹乙醇分子结构特征的半抗原;分别采用活化酯法将半抗原与牛血清白蛋白(BSA),混合酸酐法将半抗原与卵清蛋白(OVA)进行偶联,分别制备了免疫原和包被抗原。免疫原免疫4只新西兰大白兔,获得喹乙醇的抗血清,ELISA法测得其效价分别为1∶6400;1∶1600;1∶12800;1∶6400。间接ELISA法喹乙醇的抑制中浓度IC50为743.3ng/mL,最低检测限IC20为5.71ng/mL。抗血清与喹乙醇结构类似物卡巴氧、痢菌净的交叉反应均小于0.01%,无交叉反应。分别用饱和硫酸铵法和离子交换层析对抗血清进行纯化,纯化后得到了纯度较高的抗体。
本研究表明,制备的喹乙醇多克隆抗体可为进一步单克隆抗体的制备,试剂盒的开发工作打下基础。