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抗体在癌症治疗和免疫诊断中起着重要作用,抗体药物作为新一代抗肿瘤药物有着广阔的市场。目前,蛋白A亲和层析（Protein A affinity chromatography）是用于抗体纯化最常用的色谱技术平台,但其存在配体造价高昂、重复使用性差、洗脱条件苛刻等问题,一定程度上制约了抗体行业的发展。近年来,聚酰胺-胺树枝状大分子（Poly amidoamine,PAMAM）在生物医药和免疫吸附中的应用越来越多,已证明将树枝状大分子用作间隔臂是提高配基密度和吸附容量的有效手段。而基于温敏聚合物开发的温敏色谱（Temperature-responsive affinity chromatography,TRAC）则可在纯水作为流动相的条件下,通过响应温度变化调节填料表面的亲疏水性质,实现对目标物有效分离和提纯。基于此,本论文将树枝状聚合物和温敏色谱的特点相结合,制备了一种用于抗体分离纯化高容量温敏亲和色谱介质,使用纯水作流动相,仅通过改变温度,以更温和的方式（40℃上样,5℃洗脱,p H 8.0）实现了抗体蛋白的分离纯化,并且大大提高吸附容量。分离过程绿色环保,高效安全,克服了当前抗体纯化过程中酸性条件洗脱易导致蛋白失活聚集的问题。以牛血清白蛋白（Bovine serum albumin,BSA）和γ-球蛋白（γ-globulin）作为模型蛋白,探究了温度、盐浓度和p H对高容量温敏亲和色谱介质色谱性能和吸附性能的影响,讨论了抗体蛋白的分离机理,优化了色谱和吸附条件,并将其应用于实际样品中免疫球蛋白的分离纯化,取得了满意的效果。论文主要分为以下三个部分:1. 文献综述对抗体的结构和功能及其工业生产现状进行了简要介绍,重点评述了现阶段用于抗体蛋白分离纯化的色谱方法。介绍了树枝状聚合物、刺激响应性聚合物和温敏色谱在免疫吸附和蛋白纯化方面的优势和应用。2. 高容量温敏亲和色谱固定相的制备和表征以温敏树枝状聚合物（PAMAM-PNIPAM）为间隔臂,选择经济廉价、特异性强的功能小分子4-乙烯基吡啶（4-Mercaptoethyl Pyridine,MEP）为配基,以硅胶为基质成功制备了高容量温敏亲和色谱固定相Si O2-G2.0@PNIPAM-MEP。对制备的温敏亲和色谱固定相进行色谱表征,使用纯水作为流动相,以BSA和γ-球蛋白为模型蛋白,40℃上样,5℃洗脱,仅通过调节温度可实现对混合蛋白的一步分离纯化,抗体纯度可达99%,质量回收率大于90%。在此基础上,探究和讨论了温度、盐浓度和洗脱p H对抗体蛋白保留行为的影响,结果显示,温度和洗脱p H对分离影响较大,随着温度和p H的降低,色谱峰重叠,分离度变差;随着盐浓度增加,BSA保留时间增长,γ-球蛋白无明显变化,体现了配基非盐依赖性的特征。3. 高容量温敏亲和色谱固定相吸附性能研究及实际样品应用以γ-球蛋白为模型蛋白,研究了温敏亲和色谱介质的吸附性能,探究了在不同温度、盐浓度和p H条件下温敏亲和色谱介质对γ-球蛋白吸附特征的影响,计算不同条件下亲和介质的饱和吸附容量Qm和解离常数Kd,对其吸附机理进行了探讨,优化了吸附条件。结果表明升高温度和p H可以增强抗体蛋白与配基之间的亲和力和疏水作用力,盐浓度的改变对吸附容量的影响不大。之后对其动态吸附行为、吸附选择性和重用性进行了研究,亲和介质在2 h之内即可达到吸附平衡,优化条件下的饱和吸附量为140.8 mg/g,选择性和重用性也可以达到满意的效果。应用温敏亲和色谱于人血清和鸡蛋黄中分离纯化Ig G及Ig Y,结果表明,所构建的温敏亲和色谱成功从实际样品中分离了Ig G和Ig Y,纯度均可达到98%以上,显示出从复杂料液环境中纯化抗体蛋白的巨大潜力。