论文部分内容阅读
背景:齐墩果酸(Oleanolic acid,OA)和熊果酸(Ursolic acid,UA)同属五环三萜类异构体,有抗炎、保肝、降糖和抗肿瘤等多种药理效应,临床上OA已广泛应用于急慢性肝损伤的治疗。课题组前期研究证实,UA能抑制肝微粒体中UGT1A3和UGT1A4的活性,而OA则抑制UGT1A3的活性。然而,OA和UA是否影响人源性肝细胞中UGT1As靶基因的表达,是否通过孕烷X受体(NR1I2;pregnane X receptor,PXR)和组成型雄烷受体(NR1I3;constitutive androstane receptor,CAR)进行调控,均值得深入研究与探讨。目的:本实验旨在研究OA和UA对HepG 2细胞中UGT1As表达的影响及其基于PXR/CAR调控通路对UGT1A1的诱导机制,为指导OA和UA临床合理用药提供实验依据。方法:1、采用Western blot、RT-qPCR等研究手段,探究OA和UA对HepG2细胞中UGT1As、PXR和CAR的mRNA和蛋白表达水平的影响。2、采用双荧光素酶报告基因法,探究OA和UA对瞬时共转染hPXR或hCAR后HepG2细胞中UGT1A1报告基因活性的影响。3、采用shRNA干扰技术,探究OA和UA对hPXR或hCAR基因沉默后HepG2细胞中UGT 1A1 mRNA和蛋白表达水平的影响。结果:1.OA和UA对HepG2细胞中UGT1As、PXR和CAR基因表达的影响(1)10、20、40μM的OA显著上调了UGT1A1、UGT1A4、PXR的mRNA和蛋白的表达水平,且随浓度呈依赖性递增趋势。而OA对UGT1A3和UGT1A9mRNA和蛋白表达均有明显的诱导作用,尤其是20μM OA对UGT1A3和UGT1A9的诱导作用最强。(2)10、20、40μM的UA显著上调了UGT1A1、UGT1A3、UGT1A4、UGT1A9和PXR的mRNA和蛋白的表达水平,并呈浓度依赖性递增趋势。(3)OA和UA对CAR mRNA和蛋白的表达无明显的影响。2.OA和UA对瞬时共转染hPXR/hCAR的HepG2细胞中UGT1A1报告基因的影响(1)在瞬时共转染hPXR的HepG2细胞中,OA和UA干预24h后均能显著性上调PXR介导UGT1A1的转录活性,且随浓度呈现依赖性递增趋势。(2)在瞬时共转染hCAR的HepG2细胞中,OA和UA干预24h后对CAR介导UGT1A1的转录活性无明显影响。3.在hPXR/hCAR沉默的HepG2细胞中,OA和UA对UGT1A1基因表达的影响(1)与HepG2细胞相比,OA和UA对hPXR沉默的HepG2细胞中UGT1A1的诱导作用明显减弱。(2)与HepG2细胞相比,OA和UA对hCAR沉默的HepG2细胞中UGT1A1的诱导作用无明显变化。结论:1、OA及UA对HepG2细胞中UGT1A1、UGT1A3、UGT1A4、UGT1A9和PXR mRNA和蛋白的表达有明显的上调作用,但对CAR mRNA和蛋白的表达无明显影响。2、OA及UA对HepG2细胞中UGT1A1的诱导作用主要与PXR调控通路有关,CAR几乎不参与该诱导作用的调控。