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第一章缺血后处理对兔心肌缺血再灌注损伤的保护作用目的:建立缺血再灌注模型,观察缺血后处理对兔心肌缺血再灌注损伤的保护作用方法:健康新西兰大白兔随机分为3组,(1)S组,即假手术组,开胸后穿线套环,不收紧结扎线。(2)I/R组,结扎冠状动脉左前降支(LAD)30min,再灌注180min。(3)缺血后处理组,结扎LAD30min,然后灌注30s,阻断30s,重复4次,继而再灌注直至180min,2、3组分别于结扎前、结扎30min、开放后1h、开放后3h抽血,检测肌酸磷酸激酶(CK)及肌钙蛋白(cTnI)。再灌注结束后,伊文思蓝和TTC染色法测心梗面积,电镜观察各组心肌细胞超微结构的变化。结果:1.心肌酶学:各组的CK及cTnI在缺血前无明显差别(P＞0.05);I/R期间2组和3组的CK及cTnI较缺血前明显升高(P＜0.05);I/R期间2组和3组各时点的CK及cTnI与1组对应时点相比均明显升高(P＜0.05);3组的增高程度显著低于2组(P＜0.05),其中3组的cTnI在再灌注末恢复到缺血前的水平(P＞0.05)。2.心梗面积:3组的心梗面积(19.0±5.2%)明显小于2组(28.5±4.4%)(P＜0.05)。3.心肌超微结构的变化:电镜显示缺血后处理组心肌细胞损伤明显轻于I/R组。结论:缺血后处理对兔心肌缺血再灌注损伤的具有保护作用。第二章缺血后处理对兔缺血再灌注心肌的保护作用的信号传导机制目的:建立缺血再灌注模型,观察JAK-STAT信号通路及阿片受体是否介导了缺血后处理对兔心肌的保护作用。方法:健康新西兰大白兔随机分为5组,(1)S组,即假手术组,开胸后穿线套环,不收紧结扎线。(2)I/R组,结扎冠状动脉左前降支(LAD)30min,再灌注180min。(3)缺血后处理组,结扎LAD30min,然后灌注30s,阻断30s,重复4次,继而再灌注直至180min。(4)缺血后处理+JAK阻断剂AG490组,在进行缺血后处理前15min,静脉注入AG490(3mg/kg),其他同第3组。(5)缺血后处理+阿片类受体阻断剂(纳洛酮)组,在进行缺血后处理前15min,静脉注入纳洛酮(6mg/kg),其他同第3组。再灌注结束后伊文思蓝和TTC染色法测心梗面积,用原位化学法(TUNEL)法观察各组心肌细胞凋亡,免疫印迹法(Western Blot)测各组心肌Bcl-2及P-stat3的表达。结果:1.心梗面积:3组(19.0±5.2%)较2组(28.5±4.4%)有明显减少(P＜0.05),4组(27.5±6.3%)和5组(26.4±3.9%)与2组(28.5±4.4%)无明显差别(P＞0.05)。2.各组心肌细胞凋亡的变化:2、3、4、5组的心肌细胞凋亡指数均较1组明显增加(P＜0.05),3组的心肌细胞凋亡指数明显低于2、4、5组(P＜0.05)。3.各组的心肌Bcl-2蛋白表达变化:2、3、4、5组的心肌Bcl-2的表达均较1组明显增加(P＜0.05),3组的心肌Bcl-2的表达明显高于2、4、5组(P＜0.05)。4.各组心肌P-stat3蛋白表达:2、3、4、5组的心肌P-stat3蛋白表达均较1组明显增加(P＜0.05),3组的心肌P-stat3蛋白表达明显高于2、4、5组(P＜0.05)。结论:缺血后处理通过阿片受体及JAK-STAT信号通路的介导,上调BCL-2及P-stat3蛋白的表达,抑制心肌细胞的凋亡,对缺血再灌注兔心肌产生保护作用。第三章缺血后处理对缺血再灌注兔心肌蛋白质组学及蛋白质表达的研究目的:采用蛋白组学技术并加以分析验证,进一步探讨缺血后处理对心肌缺血再灌注损伤保护作用的分子机制。方法:24只新西兰大白兔随机分为假手术组、缺血再灌注组和缺血后处理组,建立缺血再灌注模型即结扎冠状动脉左前降支(LAD)30min,再灌注180min,缺血后处理组是结扎LAD30min,然后灌注30s,阻断30s,重复4次,继而再灌注直至180min,再灌注结束后,应用双向凝胶电泳技术分离两手术组兔心肌总蛋白质。通过MALDI-TOF-MS鉴定,分析相关蛋白。并采用Western blot对差异表达的蛋白进行验证。结果:经凝胶图像分析找到明显的差异蛋白质11个,基质辅助激光解析-电离飞行时间质谱对差异蛋白进行鉴定了11个蛋白质。其中有7个蛋白在缺血后处理组中高表达,这些蛋白质包括应激反应蛋白、代谢相关蛋白,抗凋亡蛋白等。Western blot方法验证了差异明显的HSP27的表达水平。结果显示:HSP27表达在两个手术组中均明显上调,且在缺血后处理组中上调更明显。结果与比较蛋白组学研究的结果一致。结论:缺血后处理的心肌保护作用涉及许多蛋白质的变化,这些差异蛋白可能通过其分子伴侣功能、清除氧自由基、改善能量代谢等发挥缺血后处理的心肌保护作用。其中,上调HSP27的表达可能是缺血后处理产生心肌保护作用的重要机制之一。