发光细菌快速检测畜产品中兽药残留研究

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畜产品中兽药残留不仅给消费者身体健康带来潜在危害,还影响畜牧业可持续性发展。研究畜产品中兽药残留的检测技术,特别是开发一些能够快速、精确、廉价判断畜产品安全及检测兽药残留的方法已成为目前国内外的研究热点。本研究基于发光细菌发光原理,以青海弧菌Q67和明亮发光杆菌T3为毒性测试菌种,通过测定其在磺胺类、呋喃类、喹诺酮类等10种常见兽药不同质量浓度下的相对发光强度和10种兽药对其半数抑制效应浓度(EC50),研究畜产品中10种兽药对发光细菌的作用规律和急性毒性效应;采用二次通用旋转组合试验设计和统计学方法,研究多种喹诺酮类兽药对青海弧菌的联合毒性,揭示多种喹诺酮类兽药共存时产生的总毒性效应和交互作用;初步探索猪肉浸提液中兽药残留对青海弧菌的作用规律及急性毒性效应。从而为建立发光细菌检测兽药残留的方法及畜产品安全评价体系提供理论依据。本研究获得的结论如下:1.试验浓度范围内,10种兽药对青海弧菌Q67相对发光强度的影响与2种兽药对明亮发光杆菌T3相对发光强度的影响表现出相同的规律,即随兽药质量浓度降低,相对发光强度增加。不同发光细菌检测水溶液中兽药残留灵敏度不同。青海弧菌Q67检测低浓度喹诺酮类兽药比磺胺类和呋喃类灵敏度高,最小检出限为0.002mg/L;明亮发光杆菌T3检测磺胺间甲氧嘧啶钠比恩诺沙星灵敏度高,最小检出限为0.1mg/L。2.一定浓度范围内,青海弧菌Q67相对发光强度与兽药质量浓度呈线性负相关(r2=0.7911~0.9890)。暴露时间为15min时,10种兽药对青海弧菌Q67的急性毒性不同,大小依次是呋喃唑酮(4.08mg/L)>呋喃西林(5.21mg/L)>左氧氟沙星(91.991mg/L)>诺氟沙星(210.788mg/L)>磺胺六甲氧嘧啶钠(476.835mg/L)>沙拉沙星(704.486mg/L)>磺胺嘧啶钠(871.196mg/L)>恩诺沙星(1219.104mg/L)>环丙沙星(1795.098mg/L)>磺胺间甲氧嘧啶钠(4454.516mg/L)。恩诺沙星和磺胺间甲氧嘧啶钠质量浓度分别为250~2000mg/L、3~24mg/L,明亮发光杆菌T3相对发光强度与兽药质量浓度呈线性负相关,决定系数分别为0.9640和0.8050。磺胺间甲氧嘧啶钠和恩诺沙星对明亮发光杆菌T3的EC50为854.440mg/L和8.262mg/L,磺胺间甲氧嘧啶钠对明亮发光杆菌T3急性毒性大于恩诺沙星。3.不同质量浓度多元喹诺酮类混合物对青海弧菌Q67联合毒性不同。通过二次通用旋转组合试验设计和统计学方法,拟合出9个兽药浓度与青海弧菌Q67相对发光强度的回归模型,决定系数为0.8919~0.9976,用于预测多种喹诺酮对青海弧菌Q67的综合毒性。多元喹诺酮类兽药混合作用于青海弧菌Q67时,其中两种兽药联合作用类型不但与组成混合物种类有关,也与混合物中各种兽药浓度密切相关,且随兽药种类增加,混合物中兽药间联合作用类型更加复杂。这可能与化合物的联合作用机理有关,有待进一步验证。4.猪肉浸提液中恩诺沙星和磺胺间甲氧嘧啶钠质量浓度分别为0.01~2500mg/L、0.03~30000mg/L时,青海弧菌Q67相对发光强度与其质量浓度呈线性负相关,决定系数为0.9070、0.9985。青海弧菌Q67检测猪肉浸提液中磺胺间甲氧嘧啶钠的最小检出限为0.1mg/L,满足农业部对畜产品中磺胺类兽药的检测要求。
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