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目的:Fbxo6是F-box蛋白家族的新成员,属于进化相对保守的泛素化蛋白连接酶复合物SCF(Skp1/Cdc53-Cullin1/F-box)的关键组成部分之一。以往的文献报道主要集中在复制应激条件下Fbxo6的作用,而只有一项研究表明,Fbxo6可以促进胃癌细胞的生长和增殖能力,但抑制胃癌细胞的凋亡和侵袭能力。然而,Fbxo6在非小细胞肺癌中是否具有生物学功能尚不清楚。研究方法:首先我们用免疫组织化学分析检测了183例非小细胞肺癌患者的组织样本中Fbxo6的表达水平,和Fbxo6与各种临床病理因素,尤其是预后因素之间的关系,并对其进行了相应统计分析。同时,我们运用稳定转染技术、瞬时基因敲减技术,对A549和A549/DDP细胞中通过蛋白质免疫印迹技术检测Fbxo6相关下游通路的变化水平。采用Chk1特异性抑制剂AZD7762改变Fbxo6的表达水平并抑制Chk1的表达后,通过蛋白质免疫分析和MTT实验以及集落形成实验来研究Fbxo6在非小细胞肺癌细胞系中对细胞增殖能力的影响,以及是否对顺铂的化疗敏感性发挥生物学作用。使用顺铂进行药物处理,A549和A549/DDP细胞通过蛋白质印迹实验来确定顺铂诱导出的凋亡和自噬水平的变化。接下来为了探索其具体机制,通过免疫共沉淀实验和泛素化分析来确定与Fbxo6相互作用的分子。最后,我们运用免疫荧光分析来检测细胞受到顺铂药物处理后Fbxo6转染和敲减各组的γH2AX变化。结果:在本实验研究中发现,Fbxo6的表达与早期TNM分期呈正相关关系(P=0.004),Fbxo6高表达的非小细胞肺癌患者其预后更好。蛋白质免疫印迹分析显示Fbxo6下调P-CHK1、CDK4、Cyclin D1的蛋白水平,MTT实验和集落形成实验表明Fbxo6抑制非小细胞肺癌细胞中的肿瘤增殖能力。此外,使用顺铂处理各组细胞后,γH2AX提示Fbxo6抑制DNA损伤后的修复反应,药物处理后Fbxo6过表达导致γH2AX修复进程加快。顺铂诱导出一定水平的凋亡后,对A549细胞转染siFbxo6,A549/DDP细胞进行转染Fbxo6 cDNA,发现Fbxo6促进非小细胞肺癌细胞的凋亡水平。同时,顺铂可以激活细胞产生更强的自噬过程,双向调控Fbxo6表达后,通过蛋白质免疫印迹分析检测显示Fbxo6抑制非小细胞肺癌肿瘤细胞的自噬变化,因此Fbxo6可以增强顺铂药物处理引起的化疗敏感性。随后通过免疫共沉淀和泛素化分析测定表明Fbxo6不仅与Chk1直接结合,还可以泛素化降解Chk1,并且降低Chk1蛋白水平和Chk1磷酸化的表达水平。在使用Chk1特异性抑制剂AZD7762后,可以抵消Fbxo6所引起的降解Chk1,进行顺铂处理后化疗敏感性增加的变化。结论:Fbxo6通过与Chk1直接结合,降解Chk1,抑制肿瘤细胞生长和增殖,抑制顺铂处理后的DNA损伤修复应答,细胞自噬水平,促进非小细胞肺癌的凋亡,进一步增强了非小细胞肺癌对顺铂处理的化疗敏感性,因此Fbxo6可以成为针对顺铂化疗敏感性的关键治疗靶点。