克氏原螯虾抗菌效应分子Reeler的功能研究

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近年来,克氏原螯虾成为我国重要的经济养殖品种,但由于尚未开发出完善的病害防治方法,造成疾病传播进而导致螯虾大面积死亡的现象。螯虾作为无脊椎动物,仅依靠先天免疫系统抵御外界病原体的侵害。因此对克氏原螯虾的先天免疫机制的深入研究有利于解决养殖过程中关于病害预防等一系列问题。我们在克氏原螯虾(Procambarus carkii)中筛选到一种含单一的reeler结构域的分子,发现其在鳃组织中高表达且其表达可显著响应细菌刺激。我们将该基因命名为PcReeler。本文以PcReeler作为对象研究其在克氏原螯虾抗菌免疫中的作用和功能机制。由于螯虾生活在水中,鳃作为气体交换的场所,直接与水体相接触,我们研究了 PcReeler在鳃组织上的定位,发现了其可能与螯虾鳃组织抗菌机制相关。通过RNAi的方法抑制PcReeler的表达,无论螯虾生活在正常的水体环境中还是在有高浓度细菌富集的水体中,都会导致螯虾鳃组织中细菌总丰度和可培养细菌的数量显著升高,螯虾存活率大幅降低。采用16S rDNA高通量测序表明PcReeler基因沉默会降低鳃组织上的细菌群落多样性,且会改变细菌分布的结构进而影响鳃组织中原有菌群的稳态。我们还表达PcReeler的重组蛋白对其进行功能研究。rPcReeler具有结合多糖分子和细菌的能力,并可抑制细菌生物被膜的形成。Reeler还具有在体外清除细菌和杀菌的能力。这些结果都为PcReeler在克氏原螯虾的抗菌免疫机制中发挥重要作用提供了直接证据。因此,本文研究了 PcReeler的功能特点,从分子水平上对克氏原螯虾的抗菌功能和作用机制有了更加深刻地理解和认识,对开发新型的螯虾病害防控策略有理论指导意义。
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