目的:恶性黑素瘤主要发生于皮肤,极易发生转移和引起患者死亡。随着肿瘤基础研究的不断深入,目前对黑素瘤的综合治疗措施(如手术、放化疗、免疫治疗等)日趋完善,但仍有部分患者难以取得令人满意的疗效。为筛选有效的黑素瘤化疗药物,本文探讨阿维A酸和沙利度胺对小鼠黑素瘤细胞株B16增殖的抑制作用及机制,为两药拟在临床中的应用提供基础实验依据。方法:以体外培养的小鼠黑素瘤细胞株B16为研究对象,用不同浓度的阿维A酸和沙利度胺处理B16细胞。1采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法,检测两药在不同时间对B16细胞增殖的抑制作用。2倒置显微镜和HE染色法观察B16细胞形态的变化。3采用流式细胞分析术,检测细胞周期变化和凋亡的发生。4应用免疫细胞化学s-p法,检测血管内皮生长因子(VEGF)的表达。5流式细胞术检测B16细胞VEGF蛋白的表达。6运用统计软件SPSS12.0对数据进行统计分析。结果:1 MTT法显示,阿维A酸和沙利度胺对B16细胞增殖有抑制效应:阿维A酸对B16细胞增殖有明显的抑制效应,0.1μmol/L、1.0μmol/L、10μmol/L和100μmol/L四个浓度的阿维A酸处理B16细胞24h后,由低浓度到高浓度的阿维A酸对B16细胞增殖的抑制率分别为20.53%、25.08%、29.31%、31.89%,处理48h后,以上四个浓度的阿维A酸对B16细胞增殖的抑制率分别为27.59%、33.30%、44.07%、48.98%,处理72h后,以上四个浓度的阿维A酸对B16细胞增殖的抑制率分别为56.10%、64.05%、69.88%、71.83%。在同一药物浓度条件下,阿维A酸对B16细胞增殖的抑制作用随时间的延长而增强。终浓度为100μmol/L的阿维A酸作用72小时后,对B16细胞的抑制率最高,为71.83%,在0.1μmol/L~100μmol/L浓度范围内,阿维A酸对B16细胞增殖的抑制率随浓度增高而增加;沙利度胺对B16细胞有轻度抑制作用,10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml四个浓度的沙利度胺处理B16细胞24h后,由低浓度到高浓度的沙利度胺对B16细胞增殖的抑制率分别为4.86%、8.67%、10.42%、9.64%,处理48h后,以上四个浓度的沙利度胺对B16细胞增殖的抑制率分别为8.25%、12.54%、16.82%、13.00%,处理72h后,以上四个浓度的沙利度胺对B16细胞增殖的抑制率分别为12.25%、16.87%、25.96%、18.36%。在同一药物浓度条件下,沙利度胺对B16细胞增殖的抑制作用随时间的延长而增强。100μg/ml沙利度胺作用72小时后,抑制率最高,为25.96%,200μg/ml沙利度胺组对B16细胞的抑制率比100μg/ml沙利度胺组低,沙利度胺在10μg/ml~100μg/ml浓度范围内,对B16细胞增殖的抑制率随浓度增高和时间延长而增加。2经阿维A酸和沙利度胺处理24小时后,倒置显微镜下即可见到B16细胞变圆,不贴壁,细胞折光性减弱或消失,对照组细胞贴壁生长良好,细胞呈梭形,透明,折光性好,细胞增生活跃。HE染色观察到阿维A酸组细胞呈团块状生长,沙利度胺组细胞与对照组相比,未见明显变化。3流式细胞检测显示,不同浓度的阿维A酸和沙利度胺作用72小时后,G0/G1期细胞比例增加(P<0.01),S期细胞比例减少(P<0.01);实验组与对照组均未检测到细胞凋亡。4免疫细胞化学s-p法显示,1.0μmol/L、10μmol/L阿维A酸作用72小时后,VEGF表达受到抑制(P<0.01);沙利度胺处理组B16细胞的VEGF表达与对照组无差异(P>0.05)。5流式细胞术检测结果显示,10μmol/L阿维A酸作用72小时后,与对照组相比,表达VEGF的阳性细胞数下降(P<0.01),VEGF的平均荧光强度下降(P<0.01);100μg/ml沙利度胺作用72小时后,与对照组相比,表达VEGF的阳性细胞数下降(P<0.01),VEGF的平均荧光强度无明显变化(P>0.05)。结论:1阿维A酸和沙利度胺能抑制B16细胞增殖,并且在一定浓度和时间范围内,二者对B16细胞增殖的抑制具有量效相关性和时间依赖性。2四个浓度的阿维A酸和100μg/ml沙利度胺均能抑制B16细胞从G0/G1期进入到S期,但两药诱导B16细胞凋亡的作用尚不明显。3阿维A酸能影响B16细胞VEGF表达,沙利度胺此作用较弱。4 B16细胞对阿维A酸的敏感性远大于沙利度胺。因此,我们认为阿维A酸对小鼠黑素瘤细胞株B16增殖和转移的抑制作用优于沙利度胺,但若二者联合应用可增加疗效,减少副作用。